一种检测呕吐毒素的免疫亲和柱及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CN104569382A(43)申请公布日(43)申请公布日2015.04.29(21)申请号201310514174.5(22)申请日2013.10.26(71)申请人北京勤邦生物技术有限公司地址102206北京市昌平区回龙观国际信息产业基地高新四街8号(72)发明人冯才伟罗晓琴万宇平何方洋常平平冯才茂杨昌松徐念琴(51)Int.Cl.G01N33/544(2006.01)G01N30/60(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图2页(54)发明名称一种检测呕吐毒素的免疫亲和柱及其应用(57)摘要本发明公开了一种检测呕吐毒素的免疫亲和柱及其应用。免疫亲和柱包括固相萃取柱空柱（1）、上筛板（2）、上盖（3）、下盖（4）、固相介质（5）、下筛板（6）；所述固相介质上偶联有呕吐毒素抗体。本发明还提供了一种应用上述呕吐毒素免疫亲和柱检测谷物及饲料中呕吐毒素残留的方法。本发明所提供的免疫亲和柱具有操作简单、灵敏度高、检测速度快、成本低等特点，适合大量样本的筛查和现场监控。CN104569382ACN104569382A权利要求书1/1页1.一种检测呕吐毒素的免疫亲和柱，包括固相萃取柱空柱（1）、上筛板（2）、上盖（3）、下盖（4）、固相介质（5）、下筛板（6），其特征在于所述固相介质上偶联有呕吐毒素抗体。2.如权利要求1所述的免疫亲和柱，其特征在于所述筛板为亲水材料，上盖和下盖为塑料材质。3.如权利要求1-2任一项所述的免疫亲和柱，其特征在于所述下筛板、下盖、固相介质、上筛板、上盖依次安装入固相萃取柱空柱上，在加入上盖之前，所述固相萃取柱已加入柱高为5/8～7/8保存液。4.如权利要求1所述的免疫亲和柱，其特征在于所述呕吐毒素半抗原-载体蛋白偶联物由呕吐毒素半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。5.如权利要求1或4任一项所述的免疫亲和柱，其特征在于所述呕吐毒素半抗原是由呕吐毒素与1,3-丙二胺反应得到，其分子结构式为：6.如权利要求1所述的免疫亲和柱，其特征在于所述呕吐毒素单克隆抗体是以呕吐毒素半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，所述羊抗鼠抗抗体是将鼠源抗体免疫羊得到。7.一种制备权利要求1-6任一项所述免疫亲和柱的方法，其包括步骤：1）制备偶联有呕吐毒素抗体的固相介质；2）将固相介质装入柱中，按亲和柱的组合、连接方式组装免疫亲和柱。8.一种检测谷物及成品饲料中呕吐毒素进行检测的方法，其包括步骤：1）样本前处理；2）样本过免疫亲和柱，提取、浓缩、纯化样本中的检测物；3）提取液进行分析检测。2CN104569382A说明书1/5页一种检测呕吐毒素的免疫亲和柱及其应用技术领域[0001]本发明涉及一种检测呕吐毒素的免疫亲和柱及其应用，具体涉及一种用于检测呕吐毒素的免疫亲和柱，其特别适用于谷物及成品饲料中呕吐毒素残留检测的样本前处理。背景技术[0002]呕吐毒素(vomitoxin)又称脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol，DON)，是单端孢菌素烯烃中的一种，它通常是由生长在谷类物品（如小麦、玉米、大麦和秣草）霉菌镰红菌素生成的。呕吐毒素的毒性效应包括：呕吐、不想进食、胃肠炎、腹泻、免疫抑制和血液病。[0003]DON广泛存在于全球，主要污染小麦、大麦、玉米等谷类作物，也污染粮食制品，人和动物在误食被该毒素污染的粮谷类后可以产生广泛的毒性效应。近年来发现DON可能与人类食管癌、IgA肾病有关，对人类及动物的健康构成威胁。人畜摄入了被DON污染的食物/饲料后，会导致厌食、呕吐、腹泻、发烧、站立不稳、反应迟钝等急性中毒症状，严重时损害造血系统造成死亡。研究表明，DON可能对免疫系统有影响，有明显胚胎毒性和一定致畸作用，可能有遗传毒性，但无致癌、致突变作用。由于DON的危害严重，引起了各国的普遍重视。谷物及饲料中DON的含量有严格的限量标准。我国谷物、猪配合饲料、犊牛配合饲料、泌乳期动物配合饲料中DON的限量标准为1.0mg/kg，牛配合饲料、家禽配合饲料中DON的限量标准为5.0mg/kg。[0004]传统的霉菌毒素提纯方法多采用有机溶剂萃取和化学吸附等方法，这些方法存在诸多不足之处：特异性不高，纯化效率低，纯化效果差；实验灵敏度和重复性差；操作过程烦琐、复杂、时间长，劳动强度大；使用有机溶剂容易造成环境污染，对操作人员伤害较大。而免疫亲和柱法能够较好地解决上面的不足，该方法采用特异性免疫反应为分离手段，大大提高了样品的纯度和纯化效率，保证了检测结果的可靠性和稳定性。我们设计的这种用免疫层析技术作为检测谷物及成品饲料中呕吐毒素的前处理方法，适合于批量样品，是理想的前处