一种检测呕吐毒素的试纸条及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN104345145104345145A(43)申请公布日2015.02.11(21)申请号201310329001.6(22)申请日2013.07.31(71)申请人北京勤邦生物技术有限公司地址102206北京市昌平区回龙观国际信息产业基地高新四街8号(72)发明人冯才伟扶胜杨学林贾芳芳景滢滢聂雯莹冯静孙震(51)Int.Cl.G01N33/558(2006.01)G01N33/532(2006.01)权权利要求书1页利要求书1页说明书7页说明书7页附图2页附图2页(54)发明名称一种检测呕吐毒素的试纸条及其应用(57)摘要本发明公开了一种检测呕吐毒素的试纸条及其应用。试纸条包括样品吸收垫（1）、结合物释放垫（2）、反应膜（3）、吸水垫（4）和底板（7），所述反应膜上具有包被有呕吐毒素半抗原-载体蛋白偶联物的检测线（5）和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线（6），所述结合物释放垫（2）喷涂有呕吐毒素单克隆抗体-胶体金标记物。本发明还提供了一种应用上述呕吐毒素试纸条检测谷物及饲料中呕吐毒素残留的方法。本发明所提供的试纸条具有操作简单、灵敏度高、检测速度快、成本低等特点，适合大量样本的筛查和现场监控。CN104345145ACN10435ACN104345145A权利要求书1/1页1.一种检测呕吐毒素的试纸条，包括样品吸收垫（1）、结合物释放垫（2）、反应膜（3）、吸水垫（4）和底板（7），其特征在于所述反应膜上具有包被有呕吐毒素半抗原-载体蛋白偶联物的检测线（5）和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线（6），所述结合物释放垫（2）喷涂有呕吐毒素单克隆抗体-胶体金标记物。2.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于所述样品吸收垫（1）、结合物释放垫（2）、反应膜（3）、吸水垫（4）依次粘贴在底板（7）上。3.如权利要求1-2任一项所述的试纸条，其特征在于所述结合物释放垫1/3~1/2被覆盖于样品吸收垫下。4.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于所述呕吐毒素半抗原-载体蛋白偶联物由呕吐毒素半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。5.如权利要求1或4任一项所述的试纸条，其特征在于所述呕吐毒素半抗原是由呕吐毒素与邻苯二甲酸酐反应得到，其分子结构式为：6.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于所述呕吐毒素单克隆抗体是以呕吐毒素半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，所述羊抗鼠抗抗体是将鼠源抗体免疫羊得到。7.一种制备权利要求1-6任一项所述试纸条的方法，其包括步骤：1）制备喷涂有呕吐毒素单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；2）制备具有包被有呕吐毒素半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；3）将1）和2）制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条。8.一种检测谷物及饲料中呕吐毒素残留的方法，其包括步骤：1）样本前处理；2）用权利要求1-6任一项所述的试纸条进行检测；3）分析检测结果。2CN104345145A说明书1/7页一种检测呕吐毒素的试纸条及其应用技术领域[0001]本发明涉及一种检测呕吐毒素的试纸条及其应用，具体涉及一种用于检测呕吐毒素的胶体金试纸条，其特别适用于谷物及饲料中呕吐毒素残留的检测。背景技术[0002]呕吐毒素(vomitoxin)又称脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol，DON)，是单端孢菌素烯烃中的一种，它通常是由生长在谷类物品（如小麦、玉米、大麦和秣草）霉菌镰红菌素生成的。呕吐毒素的毒性效应包括：呕吐、不想进食、胃肠炎、腹泻、免疫抑制和血液病。[0003]DON广泛存在于全球，主要污染小麦、大麦、玉米等谷类作物，也污染粮食制品，人和动物在误食被该毒素污染的粮谷类后可以产生广泛的毒性效应。近年来发现DON可能与人类食管癌、IgA肾病有关，对人类及动物的健康构成威胁。人畜摄入了被DON污染的食物/饲料后，会导致厌食、呕吐、腹泻、发烧、站立不稳、反应迟钝等急性中毒症状，严重时损害造血系统造成死亡。研究表明，DON可能对免疫系统有影响，有明显胚胎毒性和一定致畸作用，可能有遗传毒性，但无致癌、致突变作用。由于DON的危害严重，引起了各国的普遍重视。谷物及饲料中DON的含量有严格的限量标准。我国谷物、猪配合饲料、犊牛配合饲料、泌乳期动物配合饲料中DON的限量标准为1.0mg/kg，牛配合饲料、家禽配合饲料中DON的限量标准为5.0mg/kg。[0004]目前检测呕吐毒素的方法有多种，如薄层色谱法、酶联免疫吸附试验(ELISA）、气相色谱、高效液相色谱、红外光谱分析等。其中，仪器法灵敏、准确，但需要昂贵的仪器、样品的前处理复