一种快速检测玉米赤霉烯酮的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105713966A(43)申请公布日2016.06.29(21)申请号201610045201.2(22)申请日2016.01.24(71)申请人湖南科技大学地址411201湖南省湘潭市雨湖区石码头2号(72)发明人曾云龙任婕凤刘婷黄昊文张起豪邓克勤易守军唐春然(74)专利代理机构张家界市慧诚商标专利事务所43209代理人高红旺(51)Int.Cl.C12Q1/68(2006.01)C12N15/115(2010.01)权利要求书1页说明书3页序列表1页附图1页(54)发明名称一种快速检测玉米赤霉烯酮的方法(57)摘要本发明涉及一种快速检测玉米赤霉烯酮的方法，该方法包括如下步骤：（A）使玉米赤霉烯酮核酸适体（Apt）和可与玉米赤霉烯酮核酸适体杂交的单链信号探针ssDNA杂交，形成杂交链；（B）使该杂交链与待测样品接触，当待测样品中有玉米赤霉烯酮存在时，杂交链与玉米赤霉烯酮反应释放出单链信号探针ssDNA；（C）利用DNA扩增，使杂交链成双链DNA，然后用核酸外切酶选择性地催化双链DNA水解成单核苷酸，体系中单链信号探针ssDNA不水解而保留下来；（D）在铜离子还原检测体系中检测体系荧光强度，从而测定待测样品中的真菌毒素玉米赤霉烯酮的含量。所述方法可以消除干扰，提高了玉米赤霉烯酮的检测灵敏度和精度。CN105713966ACN105713966A权利要求书1/1页1.一种快速检测玉米赤霉烯酮的方法，其特征是，该方法包括如下步骤：（A）玉米赤霉烯酮核酸适体Apt与单链信号探针ssDNA杂交，形成杂交链；（B）使该杂交链与待测样品作用，当待测样品中有玉米赤霉烯酮存在时，杂交链选择性地与玉米赤霉烯酮反应释放出单链信号探针ssDNA；（C）为了消除杂交链的干扰，利用DNA扩增，使杂交链成双链DNA，然后用核酸外切酶选择性地催化双链DNA水解成单核苷酸，体系中单链信号探针ssDNA不水解而保留下来；（D）利用铜离子不能在玉米赤霉烯酮核酸适体-玉米赤霉烯酮结合体中被还原生成荧光发射峰在620nm左右的铜纳米粒子，铜离子只在单链信号探针ssDNA中还原并生成被ssDNA修饰的在620nm左右有强的荧光发射的铜纳米粒子的原理，在铜离子还原检测体系中检测体系的荧光强度，从而测定待测样品中的真菌毒素玉米赤霉烯酮的含量。2.根据权利要求1所述的检测玉米赤霉烯酮的方法，其特征是，所述玉米赤霉烯酮核酸适体为5’-GCATCACTACAGTCATTACGCATCGTGGGGATGGGAGGTTGTTTACGCAGGAGATGTTAATCGTGTGAAGTGC-3’。3.根据权利要求1或2所述的检测玉米赤霉烯酮的方法，其特征是，所述的单链信号探针ssDNA为5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGCACTTCACACGATT-3’。4.一种快速检测玉米烯酮的方法还提供检测玉米赤霉烯酮的试剂盒，其特征是，其至少包括：使玉米赤霉烯酮核酸适体、单链信号探针ssDNA、DNA扩增体系、外切酶、铜离子还原检测体系。5.根据权利要求4所述的检测玉米赤霉烯酮的试剂盒，其特征是，所述玉米赤霉烯酮核酸适体为5’-GCATCACTACAGTCATTACGCATCGTGGGGATGGGAGGTTGTTTACGCAGGAGATGTTAATCGTGTGAAGTGC-3’。6.根据权利要求4或5所述的检测玉米赤霉烯酮的试剂盒，其特征是，所述的单链信号探针ssDNA为5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGCACTTCACACGATT-3’。7.根据权利要求4所述的检测玉米赤霉烯酮的试剂盒，其特征是，所述DNA扩增体系包括缓冲溶液、三磷酸脱氧单核苷酸混合溶液dNTP和Phi29DNA聚合酶；所述缓冲溶液由Tris-HCl、MgCl2、(NH4)2SO4组成。8.根据权利要求4所述的检测玉米赤霉烯酮的试剂盒，其特征是，所述外切酶为ExoIII核酸外切酶。9.一种可用于检测玉米赤霉烯酮的玉米赤霉烯酮核酸适体，其特征是，其碱基序列为5’-GCATCACTACAGTCATTACGCATCGTGGGGATGGGAGGTTGTTTACGCAGGAGATGTTAATCGTGTGAAGTGC-3’。2CN105713966A说明书1/3页一种快速检测玉米赤霉烯酮的方法技术领域[0001]本发明属纳米生物传感以及生物检测技术领域，涉及玉米赤霉烯酮的检测方法及检测试剂盒。背景技术[0002]玉米赤霉烯酮主要由禾谷镰刀菌产生，粉红镰刀菌、窜珠镰刀菌、三线镰刀菌等多种镰刀菌也能产生这种毒素。李季伦1980年研究发现，许多农作物如小麦、大豆