一种新型的脱细胞带瓣血管支架及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105833356A(43)申请公布日2016.08.10(21)申请号201610297151.7(22)申请日2016.05.09(71)申请人拜欧迪赛尔（北京）生物科技有限公司地址100176北京市北京经济技术开发区凉水河二街8号院13号楼6层601A(72)发明人史真史伟云(51)Int.Cl.A61L31/00(2006.01)权利要求书1页说明书2页(54)发明名称一种新型的脱细胞带瓣血管支架及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种新型的生物工程脱细胞带瓣血管支架及其制备方法。其发明要点包括：过程中全程使用包含一种或多种带瓣血管结构保护剂的混合保护液；采用高静压技术预分离带瓣血管组织内的细胞；采用少量复合核酸酶和去垢剂方法消化带瓣血管组织内残余细胞核；使用混合保护液进行漂洗；能在6小时内得到完全脱净细胞的带瓣血管组织。本发明能够在细胞核脱干净的基础上，最大限度地降低带瓣血管组织中的免疫原性，同时保留了带瓣血管组织的正常胶原纤维的三维结构及排列极性，使制得的脱细胞带瓣血管组织具有良好的生物相容性，而且具有较强生物力学性能。CN105833356ACN105833356A权利要求书1/1页1.一种新型的生物工程脱细胞带瓣血管支架及其制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)取动物动脉血管；(2)使用包含一种或多种保护带瓣血管功能和组织完整性的混合保护液；(3)使用高静压预分离血管内的细胞；(4)采用复合核酸酶去除破碎细胞核；(5)利用去垢剂脱除松散破碎细胞；(6)在带瓣血管混合保护液中漂洗去除多余的核酸酶和细胞碎片；(7)获得具有正常胶原纤维的三维结构及排列极性的带有生物特性的脱细胞带瓣血管。2.如权利要求1所述的制备方法，所取带瓣血管为新鲜成年猪或牛的升主动脉和主动脉弓及6-8mm长的冠状动脉。3.如权利要求1所述的制备方法，其中所述混合保护液包括RPMI-1640培养基、硫酸软骨素、右旋糖苷、甘油、新霉素等及其组合。并需调节ph值与渗透压。4.如权利要求1所述的制备方法，高静压技术包括不同的压力、时间和频率参数等。5.如权利要求1所述的制备方法，其中所述复合核酸酶包括DNA酶、RNA酶其他核酸酶及其组合。6.如权利要求1所述的制备方法，其中所述去垢剂包括十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、海藻酸钠、CHAPS活性剂中的一种或多种作为组合。7.如权利要求1所述的制备方法，其中在带瓣血管混合保护液中漂洗去除多余的核酸酶和细胞碎片中漂洗的时间为2～5小时。8.如权利要求1所述的制备方法，制备的带瓣血管支架需贴附在硝酸甘油模上，放入无水氯化钙分子筛内脱水，经装袋密封并标记，用辐照剂量为25kGy的Gamma射线辐照灭菌5-10小时后在4℃下保存备用。9.如权利要求3所述的制备方法，其中所述混合保护液成分组成为：RPMI-1640培养基；硫酸软骨素的浓度为20-50g/L；右旋糖酐的浓度为10-20g/L；甘油100-200g/L；新霉素5-10mg/L。调节ph值为6.8-7.2，渗透压为300-400mOsm。10.如权利要求4所述的制备方法，其中所述的静压压力条件为200-500MPa，高静压频率为3-6次，每次为1～3分钟。11.如权利要求5，其中所述复合核酸酶使用DNA酶时DNA酶的浓度为1000-2000U/ml，使用核酸酶时浓度为1000-2000U/ml，DNA酶或核酸酶的脱细胞核时间为2-4小时，处理温度为15-30摄氏度。12.如权利要求6所述的制备方法，其中所述去垢剂十二烷基磺酸钠的浓度为0.1-5％，十二烷基硫酸钠的浓度为0.1-5％，海藻酸钠的浓度为0.1-5％，去垢剂使用时间为2-4小时。2CN105833356A说明书1/2页一种新型的脱细胞带瓣血管支架及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及生物工程医用材料的制备领域，具体为脱细胞带瓣血管支架的制备方法。背景技术[0002]复杂大血管畸形及大血管的外伤的治疗，特别是儿童及婴幼儿先天性心脏和血管畸形的疾病，需要各种直径和大小的血管或带瓣管道来修复。目前临床上应用的血管有人工合成和生物血管或带瓣管道两大类。人工合成材料(或改性材料)，由于有难以克服的非生理性和弹性及拉力的问题，且阻碍了正常血液流动状态，加上手术后的血栓率高，必须终身服用抗凝药物可能，所以临床上没有得到应用。而较理想的是生物带瓣血管具有天然支架结构，最佳血流动力学，不需抗凝的优点，其中以同种异体血管的临床应用技术较为成熟和有较好的治疗效果，但我国没有脑死亡法，同种异体带瓣管道几乎无法取得。所以寻求异种异体的血管成为当前临床治疗复杂心血管外科治疗的热点和难点。而目前异种异体带瓣血管脱细胞和抗原的技术还存在问题，临