一种脱细胞肺支架及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107096070A(43)申请公布日2017.08.29(21)申请号201710137190.5(22)申请日2017.03.09(71)申请人中国医学科学院阜外医院地址100037北京市西城区北礼士路167号阜外医院(72)发明人黑飞龙马金辉鞠志海于洁乔叶薷候陈玮王晨陈书弘罗富良(74)专利代理机构北京欣永瑞知识产权代理事务所(普通合伙)11450代理人张庆敏(51)Int.Cl.A61L27/36(2006.01)权利要求书2页说明书6页附图3页(54)发明名称一种脱细胞肺支架及其制备方法(57)摘要本发明提供一种脱细胞肺支架，其采用十二烷基醚硫酸钠联合DNaseⅠ溶液进行灌注处理而成。本发明langendorff灌注系统制备出来的脱细胞肺支架细胞去除干净，三维结构和细胞外基质蛋白保留完整，同种异体皮下移植6周后融合性、细胞化和血管化良好。本发明的制备方法效率高，步骤简单，可以进行量化生产，在组织工程肺及疏松器官领域有良好的应用前景。CN107096070ACN107096070A权利要求书1/2页1.一种脱细胞肺支架，其采用十二烷基醚硫酸钠联合DNaseⅠ溶液进行灌注处理而成。2.根据权利要求1所述脱细胞肺支架，其特征在于，所述十二烷基醚硫酸钠的体积百分浓度为0.1-1％，所述DNaseⅠ溶液的浓度为20-30ug/ml。3.根据权利要求1或2所述脱细胞肺支架，其特征在于，所述脱细胞肺支架采用先将肺支架经0.1-1％的十二烷基醚硫酸钠处理2-3小时；然后再在25℃下将20-30ug/mlDNaseⅠ溶液以流速为1-2ml/min处理0.5-1h。4.根据权利要求1-3任意一项所述脱细胞肺支架，其特征在于，所述脱细胞肺支架采用如下方法制成：1)先将离体处理后的肺支架进行肝素化的PBS溶液灌洗；2)然后采用0.1-1％十二烷基醚硫酸进行灌洗，并再用去离子水进行灌洗；3)随后采用20-30ug/ml的DNaseⅠ溶液进行灌洗处理，并用去离子水进行灌洗；4)最后用含抗生素的PBS溶液灌洗。5.根据权利要求4所述脱细胞肺支架，其特征在于，所述脱细胞肺支架依次灌注以下溶液处理而成：1)肝素化的PBS：肝素10u/ml，15min；2)0.1-1％十二烷基醚硫酸：用去离子水稀释，2-3h，十二烷基醚硫酸总用量为0.6-9ml；3)去离子水：15min；4)核酸酶应用液：DNase1液20-30ug/ml，用去离子水稀释，25℃，流速为1-2ml/min，0.5-1h，总用量为0.6-3.6mg；5)去离子水：15min；6)含抗生素的PBS：青霉素G500U/ml，链霉素500ug/ml，两性霉素B25ug/ml，2h。6.制备权利要求1-5任意一项所述脱细胞肺支架的方法，其特征在于，所述方法采用先将肺支架经0.1-1％十二烷基醚硫酸的处理2-3小时；然后再在25℃下将20-30ug/mlDNaseⅠ溶液以流速为1-2ml/min处理0.5-1h。7.根据权利要求6所述脱细胞肺支架的制备方法，其特征在于，包括如下方法：1)先将离体处理后的肺支架进行肝素化的PBS溶液灌洗；2)然后采用0.1-1％十二烷基醚硫酸进行灌洗，并再用去离子水进行灌洗；3)随后采用20-30ug/ml的DNaseⅠ溶液进行灌洗处理，并用去离子水进行灌洗；4)最后用含抗生素的PBS溶液灌洗。8.根据权利要求7所述脱细胞肺支架的制备方法，其特征在于，所述脱细胞肺支架依次灌注以下溶液处理：1)肝素化的PBS：肝素10u/ml，15min；2)0.1-1％十二烷基醚硫酸：用去离子水稀释，2-3h，十二烷基醚硫酸总用量为0.6-9ml。3)去离子水：15min；4)核酸酶应用液：DNase1液20-30ug/ml，用去离子水稀释，25℃，流速为1-2ml/min，0.5-1h，总用量为0.6-3.6mg；5)去离子水：15min；2CN107096070A权利要求书2/2页6)含抗生素的PBS：青霉素G500U/ml，链霉素500ug/ml，两性霉素B25ug/ml，2h。3CN107096070A说明书1/6页一种脱细胞肺支架及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及组织工程人工肺领域，具体地说，是一种脱细胞肺支架及其制备的方法。背景技术[0002]目前，由于环境因素、遗传因素、个人因素等原因，慢性阻塞性肺疾病(COPD)、特发性肺纤维化(IPF)、ɑ-1抗胰蛋白酶缺乏，肺动脉高压等肺疾病越来越多，对于这些病人来说，肺移植是唯一效果肯定的治疗方法。但由于供体严重缺乏、免疫排斥反应、疾病传播、远期生存率低等原因制约了肺移植的开展。目前每年肺移植全球仅不足3700例，远远达不到需求。随着组织工