磁珠法粪便细菌基因组DNA/病毒RNA快速提取方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105950610A(43)申请公布日2016.09.21(21)申请号201610402154.2(22)申请日2016.06.07(71)申请人杭州卓立纳米科技有限公司地址310052浙江省杭州市滨江区滨安路1180号7幢6层609、610室(72)发明人杨磊(74)专利代理机构上海精晟知识产权代理有限公司31253代理人冯子玲(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称磁珠法粪便细菌基因组DNA/病毒RNA快速提取方法(57)摘要本发明公开了一种磁珠法粪便细菌基因组DNA/病毒RNA快速提取方法。其步骤是：S1、取粪便于离心管中，加入bufferA，破碎静置，取上清液于新的离心管中；S2、向上清液中先后加入bufferB和bufferC，水浴加热；S3、DNA/RNA的吸附：裂解完成后，先后加入bufferD和bufferE，涡旋振荡、静置、磁分离，留下固体物；S4、向留下固体物的离心管先后加入bufferF和bufferG，涡旋振荡，磁分离；S5、在经过步骤4处理后的离心管中加入bufferH，涡旋振荡、水浴加热、再次涡旋振荡，冷却并磁分离，将上清液移到新的离心管中备用。CN105950610ACN105950610A权利要求书1/1页1.一种磁珠法粪便细菌基因组DNA/病毒RNA快速提取方法，其特征在于：该提取方法的步骤是：S1、粪便前处理：称取人或动物粪便于离心管中，加入bufferA，待粪便充分破碎后进行静置，待离心管固体沉淀、有上清液析出时，取上清液于新的离心管中，以备后续实验；所述bufferA由浓度为0.1～1M磷酸二氢钾和浓度为0.1～1M的氯化钠溶液按体积比1：1～5混合而成；S2、粪便中微生物的裂解：向盛放初级上清液的离心管中先后加入bufferB和bufferC，涡旋振荡混合均匀，在低于摄氏100度的条件下水浴加热；所述bufferB由浓度0.1～10mol/L胍盐、浓度1～50mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐和浓度10～100mmol/L的十二烷基硫酸钠按体积比1：1～3：1～5混合而成；pH值范围为4.0～7.0；所述bufferC为1～50mg/mL蛋白酶K；S3、DNA/RNA的吸附：裂解完成后，先后加入bufferD和bufferE，涡旋振荡，在充分混匀后静置；然后将静置后的离心管放入磁力架上进行磁分离，去除离心管中的液体，留下固体物；所述bufferD为磁珠；所述bufferE为体积浓度20～80％的醇溶液；S4、残留杂质的去除：向留下固体物的离心管先后加入bufferF和bufferG，涡旋振荡，充分混匀后进行磁分离；所述bufferF由浓度0.1～10mol/L盐溶液和浓度1～50mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐按体积比1：1～5混合而成，pH值为5～10；所述BufferG为1～50mmol/L的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液；S5、DNA/RNA的洗脱：在经过步骤4处理后的离心管中加入bufferH，涡旋振荡，待充分混匀后进行水浴加热；然后再次涡旋振荡，充分混匀，冷却到室温后进行磁分离，得到含有基因组NDA/RNA的洗脱液，将洗脱液移到新的离心管中备用；所述bufferH为浓度0.1～10mol/L盐酸盐溶液，pH值为6～10。2.根据权利要求1所述的磁珠法粪便细菌基因组DNA/病毒RNA快速提取方法，其特征在于：在步骤4中，当bufferF的pH值范围不在5～10之间时，加入30％～80％的醇溶液调节bufferF的pH值范围为5～10。3.根据权利要求1所述的磁珠法粪便细菌基因组DNA/病毒RNA快速提取方法，其特征在于：在步骤2中，水浴加热的温度为37℃～95℃；水浴加热的时间为10分钟至1小时。4.根据权利要求1所述的磁珠法粪便细菌基因组DNA/病毒RNA快速提取方法，其特征在于：在步骤5中，水浴加热的温度为30℃～75℃；水浴加热的时间为1分钟至10分钟。5.根据权利要求1所述的磁珠法粪便细菌基因组DNA/病毒RNA快速提取方法，其特征在于：在步骤2、3、4、5中，涡旋振荡的时间为3～30秒。6.根据权利要求1所述的磁珠法粪便细菌基因组DNA/病毒RNA快速提取方法，其特征在于：在步骤3中，静置的时间为1～10min。2CN105950610A说明书1/4页磁珠法粪便细菌基因组DNA/病毒RNA快速提取方法技术领域[0001]本发明涉及分子生物学、医学技术领域，具体地说涉及一种磁珠法粪便细菌基因组DNA/病毒RNA快速提取方法。背景技术[0002]肠道菌群是机体的重要组成部分，其菌群结构数量和种类的变化与机体的健康和疾病有着密切关系，人和动