磁珠法拭子基因组DNA提取试剂盒.doc

磁珠法·自动化：为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案

磁珠法拭子基因组DNA提取试剂盒

磁珠法拭子基因组DNA提取试剂盒MagBeadsSwabDNAExtractionKit

【目录号】SDE-5010、SDE-5030、SDE-5100
【运输条件】2~25℃；
【保存条件】磁珠悬浮液2~8℃；蛋白酶K-20℃；其它组分室温；
【试剂盒组成】
KitComponent
试剂盒组成SDE-5010
适用于100份样品SDE-5030
适用于300份样品SDE-5100
适用于1000份样品①SDE-Buffer1
拭子保存液40mL120mL400mL②ProteinaseKsolution
蛋白酶K溶液2mL6mL20mL③SDE-Buffer2
拭子缓冲液20mL60mL200mL④SDE-MagneticBeads
磁珠悬浮液8mL24mL80mL⑤WashBuffer1
清洗液160mL180mL600mL⑥WashBuffer2
清洗液2（浓缩液）30mL
(加入120mL无水乙醇)90mL
(加入360mL无水乙醇)150mL*2
(加入600mL无水乙醇)⑦DealcoholBuffer
除醇液40mL120mL400mL=8\*GB3⑧SDE-EluteBuffer
拭子洗脱液10mL30mL100mL【注意事项】
磁珠悬浮液严禁反复冻融和离心，以免磁珠受到损害。使用前务必充分混匀；
首次使用试剂盒，请按清洗液2标签提示加入无水乙醇，稀释备用；
蛋白酶K请于-20℃长期保存，避免反复冻融；融化后4℃保存，并尽快使用；
为了达到最佳效果，建议使用新鲜拭子样本，或者4℃存放少于3天的样本，样本反复冻融将导致核酸得量严重降低；
如需去除RNA请自备RNaseA溶液（100mg/mL，分散液：10mMTris-HCl、1mMEDTA、pH值8.0）；
请务必仔细阅读本试剂盒操作说明书，并严格按照操作步骤完成操作。
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【产品简介】
本试剂盒适用于从口腔拭子、宫颈拭子等样本中提取基因组DNA或病毒DNA。试剂盒采用独特分离作用的磁珠和缓冲液系统，磁珠表面修饰有特殊化学基团，在一定条件下对DNA具有极强的特异性亲和力，而当条件改变时，磁珠可逆的释放DNA，从而达到快速分离纯化DNA的目的，并可最大限度的去除蛋白质及其它杂质，从而保证提取DNA的纯度。所得基因组DNA产物OD260/280比值在1.7~1.9之间，可直接用于酶切、PCR、荧光定量PCR、测序、文库构建等下游实验。本试剂盒可在EP管中进行手动操作，亦可配合核酸提取仪使用，实现高通量操作。
【试剂盒说明】
样本类型样本量DNA提取范围口腔拭子、宫颈拭子等1个0.6~3.5μg【自备仪器、耗材和试剂】
仪器自动版
英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪、核酸提取仪配套用磁棒套、水浴锅或金属浴、涡旋振荡仪、96孔方孔圆底板、无水乙醇、异丙醇。
手动版
水浴锅或金属浴、涡旋振荡仪、真空干燥箱、无水乙醇、异丙醇、2.0mLEP管、EP管配套用磁力架。
【仪器自动版操作步骤】
本操作以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例，同步可完成32个样本的提取。
96孔板上样准备
参照下表用量向96孔板各孔位中分别加入相应试剂：
样品孔位1、72、83、94、105、116、12试剂磁珠悬浮液75μL
清洗液1600μL异丙醇
300uL清洗液2
600μL清洗液2
600μL除醇液
400μL洗脱液
100μL注：1）每次吸取磁珠悬浮液前尽量摇晃均匀；2）为提高效率建议使用排枪。
拭子样本裂解
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1）将拭子棉头或刮头剪下，转移至2.0mLEP管中，加入400μL拭子保存液、20μL蛋白酶K和200μL拭子缓冲液，使溶液完全浸润拭子，涡旋震荡。
注：1）若拭子样本中已经含有保存液，只需补加拭子保存液至400μL即可；2）若需去除RNA，请在上述混合液中加入4μLRNaseA溶液。
2）将EP管于58℃温浴15min，期间每隔5min摇晃混匀一次；
3）12000rpm离心30s，将EP管内所有液体收集到底部，待用。
上机提取
将全部裂解上清液转入96孔板第2/8列对应孔位中，将96孔板置于ETP-300型核酸提取仪中、插入磁棒套、打开仪器操作软件，调用“拭子DNA提取实验方法”程序，单击“运行”执行程序。
“拭子DNA提取实验方法”程序各参数设置如下，如果原程序不慎丢失，可自行设定：
步骤
编号孔位运行类型振荡时间(秒)分离时间(秒)挥发时间(秒)振荡
幅度振荡强度一组温度(℃)二组温度(℃)三组温度(℃)四组温度(℃)11磁珠转移2505强000022DNA结合240504中000031清洗1180505强000042DNA结合4801504中000