磁珠法提取稳定型细菌基因组DNA的试剂盒及其提取方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113388611A(43)申请公布日2021.09.14(21)申请号202110722206.5(22)申请日2021.06.28(71)申请人武汉纺织大学地址430200湖北省武汉市江夏区阳光大道1号(72)发明人钟亚平王栋鲁振坦(74)专利代理机构武汉卓越志诚知识产权代理事务所(特殊普通合伙)42266代理人胡婷婷(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)权利要求书2页说明书6页附图2页(54)发明名称磁珠法提取稳定型细菌基因组DNA的试剂盒及其提取方法(57)摘要本发明提供了一种磁珠法提取稳定型细菌基因组DNA的试剂盒及其提取方法。该试剂盒包括用于裂解释放细菌基因组DNA的裂解试剂组和用于提取基因组DNA的提取试剂组；所述裂解试剂组由缓冲液和裂解液组成；所述提取试剂组由磁珠结合液、洗涤液、洗脱液组成；所述磁珠结合液由钠盐柠檬酸钠或乙酸钠、还原剂二硫苏糖醇、盐酸胍和磁珠混悬液四者组成。本发明经过对上述各原料进行合理复配，得到磁珠结合液复配体系的最佳比例及结合提取条件，同时优化了提取方法，使得提取出的细菌基因组DNA纯度高、片段完整，且不易降解，稳定性远优于市售试剂盒，在DNA的存储、杂交、PCR等后续实验中优势显著；同时试剂均无毒性，对环境污染小。CN113388611ACN113388611A权利要求书1/2页1.一种磁珠法提取稳定型细菌基因组DNA的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括用于裂解释放细菌基因组DNA的裂解试剂组和用于提取基因组DNA的提取试剂组；所述裂解试剂组由缓冲液和裂解液组成；所述提取试剂组由磁珠结合液、洗涤液、洗脱液组成；所述磁珠结合液由钠盐柠檬酸钠或乙酸钠、还原剂二硫苏糖醇、核酸酶抑制剂盐酸胍和磁珠混悬液四者组成；所述磁珠结合液中，钠盐的浓度为0.05～0.15M，二硫苏糖醇的含量为0.5～1.5wt％，盐酸胍的浓度为2～5M。2.根据权利要求1所述的磁珠法提取稳定型细菌基因组DNA的试剂盒，其特征在于：所述磁珠混悬液中，磁珠的粒径为0.5～5μm。3.根据权利要求2所述的磁珠法提取稳定型细菌基因组DNA的试剂盒，其特征在于：所述磁珠表面修饰有羟基或羧基。4.根据权利要求2所述的磁珠法提取稳定型细菌基因组DNA的试剂盒，其特征在于：所述磁珠混悬液由磁珠与异丙醇按照质量比1：(30～50)混合配置而成，所述磁珠结合液的pH值为7.5～8.5。5.根据权利要求1所述的磁珠法提取稳定型细菌基因组DNA的试剂盒，其特征在于：所述磁珠结合液中，钠盐的浓度为0.1M，二硫苏糖醇的含量为1wt％，盐酸胍的浓度为5M。6.根据权利要求1所述的磁珠法提取稳定型细菌基因组DNA的试剂盒，其特征在于：所述洗涤液为体积分数75～85％的异丙醇水溶液或乙醇水溶液；所述洗脱液为蒸馏水、去离子水、超纯水中的一种。7.根据权利要求1所述的磁珠法提取稳定型细菌基因组DNA的试剂盒，其特征在于：所述缓冲液为包含质量分数0.5～1.5％曲拉通、1～10mM乙二胺四乙酸二钠、15～25mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐和质量分数0.1～0.5％溶菌酶的混合水溶液，所述缓冲液的pH值为7.0～8.0。8.根据权利要求1所述的磁珠法提取稳定型细菌基因组DNA的试剂盒，其特征在于：所述裂解液为包含0.2～0.4M氯化钠、质量分数1～3％十六烷基三甲基溴化铵的混合水溶液，所述裂解液的pH值为7.0～8.0。9.一种稳定型细菌基因组DNA的提取方法，其特征在于：采用权利要求1至8中任一项权利要求所述的磁珠法提取稳定型细菌基因组DNA的试剂盒进行提取，包括如下步骤：S1，取1～4mL新鲜过夜培养的细菌培养液至离心管中，10000～12000转/分钟离心1～5分钟，弃上清，加入150～300μL缓冲液，用移液器吹打10～15s，混匀菌液，然后置于37℃水浴锅孵育30～60分钟；S2，向步骤S1的离心管中加入300～800μL裂解液，用移液器吹打10～15s，混匀菌液，然后置于65℃水浴锅孵育10～30分钟；S3，向步骤S2的离心管中加入10～20μL磁珠结合液，用移液器吹打10～15s后静置1～3分钟，然后用磁力架进行磁分离，吸弃液体；S4，向步骤S3的离心管中加入500～1000μL洗涤液，用移液器吹打10～15秒后静置10～30s，然后用磁力架进行磁分离，吸弃液体，开盖室温静置5～10分钟；S5，向步骤S5的离心管中加入50～100μL洗脱液，用移液器吹打10～15s后静置1～3分钟，然后用磁力架进行磁分离，吸取上清液体至新离心管中，得到稳定型细菌基因组DNA。2CN113388611A权利要求书2/2页10.根据权利要求9所述的稳定型细菌基因组DNA的提取方