磁珠法FFPE组织中DNA提取方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109957563A(43)申请公布日2019.07.02(21)申请号201910367598.0(22)申请日2019.05.05(71)申请人上海睿璟生物科技有限公司地址201100上海市闵行区召楼路3632号2幢5层(72)发明人高伙妮金安娜龚伟卞珍张志帅包文静(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)权利要求书1页说明书3页附图1页(54)发明名称磁珠法FFPE组织中DNA提取方法(57)摘要本发明公开了医药技术领域的一种磁珠法FFPE组织中DNA提取方法，使用新型脱蜡液，可同时在脱蜡液中进行FFPE样本的消化，将DNA释放到混合液中，再加入独特的磁珠，使其与DNA特异性结合。在一定比例的乙醇漂洗液中，将该体系中的蛋白质和其余杂质去除，只留下磁珠上结合的DNA，最后DNA在水溶液或低盐缓冲液中进行洗脱，得到的DNA。本发明具有简便、快速和操作安全等优点。CN109957563ACN109957563A权利要求书1/1页1.一种磁珠法FFPE组织中DNA提取方法，其特征在于：使用试剂盒提取DNA的实验流程如下：1)取样：每个样本选取1～3张未染色5-10μm厚FFPE切片，置于干净的纸巾上，另取干净1.5mL离心管，并标记好样本名或编号；2)先用移液器取200μL脱蜡液加入到离心管中，将刮取组织的刀片在离心管中浸湿；3)用刀片从切片上刮下石蜡包埋的组织，转移至离心管中，再取200μL脱蜡液冲洗刀片上残留组织样本至离心管中，涡旋混匀20s；4)短暂离心，置于恒温混匀仪上56℃孵育5min，再涡旋混匀20s；5)短暂离心，加入20μL蛋白酶K，盖好管盖上下颠倒混匀，加入200μL裂解消化液，涡旋混匀10s；6)短暂离心，置于恒温混匀仪上56℃，800rpm振荡孵育2小时，再90℃孵育60min；7)从冰箱取出磁珠室温平衡30min；8)孵育完的组织短暂离心，取下层消化液转移至新的1.5mL离心管，并标记好样本名或编号；9)消化液中加入300μL结合液和20μL磁珠至样本中，涡旋混匀20s，短暂离心，室温孵育5min，期间颠倒混匀数次；10)将样本转移至磁力架上吸附2min，吸弃上清液；11)加入500μL漂洗液1，涡旋混匀15s重悬磁珠，将样本转移至磁力架上吸附2min，吸弃上清液；12)加入500μL漂洗液2，涡旋混匀15s重悬磁珠，将样本转移至磁力架上吸附2min，吸弃上清液；13)重复步骤12一次；14)短暂离心，将样本管转移至磁力架上吸附1min，吸弃所有残余液；15)打开管盖，室温干燥5～10min；16)加入50μL洗脱液，提前55℃预热，涡旋打散磁珠；55℃，1500rpm振荡孵育10min；17)将样本管转移至磁力架上吸附2min，把上清转移至新的1.5mL离心管中，-80℃保存。2CN109957563A说明书1/3页磁珠法FFPE组织中DNA提取方法技术领域[0001]本发明涉及医药技术领域的一种磁珠法FFPE组织中DNA提取方法。背景技术[0002]近年来，随着分子生物学的快速发展，基因检测技术逐渐从实验室走向临床，在分子病理诊断方面得到广泛的应用。由于基因变异对于肿瘤的发生发展具有关键的作用，通过检测肿瘤组织中特定基因的改变情况，能够对于疾病的分型和诊断、用药指导及预后判断提供很大的帮助。因此从临床获得的石蜡包埋组织样本中提取足够高质量的核酸是开展后续基因检测的必要条件。[0003]传统FFPE样本核酸提取方法主要是通过二甲苯进行脱蜡，再用不同比例乙醇溶液去除二甲苯。最后采用酚氯仿或硅胶膜进行DNA的分离纯化。以上方法存在几个的问题：一是使用的二甲苯、苯酚、氯仿等有机试剂存在毒性，可能侵害实验人员的身体健康；其次，使用二甲苯脱蜡，乙醇洗涤再进行组织的消化不仅耗时长，步骤繁杂，还容易造成样本的损失，减少产物得率。发明内容[0004]本发明的目的是克服传统FFPE样本核酸提取方法中存在的问题：一是使用的二甲苯、苯酚、氯仿等有机试剂存在毒性，可能侵害实验人员的身体健康；其次，使用二甲苯脱蜡，乙醇洗涤再进行组织的消化不仅耗时长，步骤繁杂，还容易造成样本的损失，减少产物得率，提供一种磁珠法FFPE组织中DNA提取方法。[0005]本发明是通过以下技术方案实现的：[0006]使用试剂盒提取DNA的实验流程如下：[0007]1)取样：每个样本选取1～3张未染色5-10μm厚FFPE切片，置于干净的纸巾上，另取干净1.5mL离心管，并标记好样本名或编号；[0008]2)先用移液器取200μL脱蜡液加入到离心管中，将刮取组织的刀片在离心管中浸湿；[0009]3)用刀片从切片上刮下石蜡包埋的组织，转移至离心管中，再取200μL