一种磁珠法提取细菌基因组DNA的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112458084A(43)申请公布日2021.03.09(21)申请号202011632314.5(22)申请日2020.12.31(66)本国优先权数据202010627062.02020.07.02CN(71)申请人上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司地址201109上海市闵行区剑川路468号(72)发明人崔大祥李雪玲王亚迪曹长风田静梁辉金彩虹(74)专利代理机构上海东亚专利商标代理有限公司31208代理人董梅(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)权利要求书1页说明书3页(54)发明名称一种磁珠法提取细菌基因组DNA的方法(57)摘要本发明公开了一种基于磁珠法提取细菌基因组DNA的方法，可以去除抑制性物质残留，获得高纯度的DNA，克服当前分子扩增和检测领域中所遇到的由于抑制性物质较多而造成下游基因组DNA扩增和检测失败的问题。采用本发明方法提取的DNA还可适用于各种常规分子生物学操作，如酶切、PCR、实时荧光PCR、LAMP、文库构建、Southern杂交、芯片检测、高通量测序等。CN112458084ACN112458084A权利要求书1/1页1.一种磁珠法提取细菌基因组DNA的方法，其特征在于，基于磁珠法提取细菌基因组DNA，去除抑制性物质残留，以获得高纯度的DNA，包括以下步骤：（1）取1ml细菌培养液至1.5ml离心管，11000rpm离心5分钟，弃上清液，得细菌沉淀；（2）在细菌沉淀中加250μl溶菌酶溶液，漩涡混和器混匀，在37℃中保温10分钟；（3）取20μl充分混匀的磁珠混合液加到离心管中，充分混匀，然后将离心管置入磁力架中，待磁珠被吸到管壁，吸出所有液体弃去；（4）加600μl洗涤缓冲液到离心管，从磁性架子中取下离心管，混匀后再将离心管放回磁性架子中，然后吸出所有液体弃去；加600μl洗涤缓冲液到离心管，从磁性架子中取下离心管，混匀后再将离心管放回磁性架子中，然后吸出所有液体弃去；加600μl洗涤缓冲液到离心管，从磁性架子中取下离心管，混匀后再将离心管放回磁性架子中，然后吸出所有液体弃去；（5）加200μl灭菌水到离心管，混匀，在45℃条件下保温3分钟后，转入冰浴1-3分钟，得DNA溶液；（6）将离心管插入磁性架子中，小心地取出下面的DNA溶液到一个洁净的离心管。2.根据权利要求1所述的一种磁珠法提取细菌基因组DNA的方法，其特征在于，所述的溶菌酶溶液浓度为0.1g溶菌酶/10ml10mmol/LTris.Cl，pH8.0。3.根据权利要求1所述的一种磁珠法提取细菌基因组DNA的方法，其特征在于，所述磁珠混合液为常规配制，或为市售磁珠混合液。4.根据权利要求1所述的一种磁珠法提取细菌基因组DNA的方法，其特征在于，所述洗涤缓冲液为20mmol/LTris-ClpH7.4,1mMEDTA。2CN112458084A说明书1/3页一种磁珠法提取细菌基因组DNA的方法技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，具体涉及一种磁珠法提取细菌基因组DNA的方法。背景技术[0002]细菌基因组DNA提取是当前分子扩增和检测领域中最基本的实验操作之一，有着很多经典的方法，如CTAB法，但是这些方法针对样本中含有较多抑制性物质（如蛋白、肽链、RNA、多糖等）的基因组DNA提取无法达到理想的效果（尤其是在基因组含量较少的情况下），并且耗时较长，溶剂使用也对人体伤害较大。近年来，磁珠法在细菌基因组DNA提取应用中越来越多地受到关注，但也很难排除抑制性物质残留，从而影响到下游基因组DNA扩增和检测。因此，需要一种减少抑制性物质残留、提高DNA纯度的细菌基因组DNA提取方法。发明内容[0003]为去除样本中的抑制性物质而特异性获得DNA，克服当前分子扩增和检测领域中所遇到的由于抑制性物质较多而造成下游基因组DNA扩增和检测失败的问题，本发明目的在于提供一种磁珠法提取细菌基因组DNA的方法。[0004]本发明目的通过以下方案实现：一种磁珠法提取细菌基因组DNA的方法，其特征在于基于磁珠法提取细菌基因组DNA的改进方法，可以去除抑制性物质残留，获得高纯度的DNA，该方法包括以下步骤：一种磁珠法提取细菌基因组DNA的方法，其特征在于，基于磁珠法提取细菌基因组DNA，去除抑制性物质残留，以获得高纯度的DNA，包括以下步骤：（1）取1ml细菌培养液至1.5ml离心管，11000rpm离心5分钟，弃上清液，得细菌沉淀；（2）在细菌沉淀中加250μl溶菌酶溶液，漩涡混和器混匀，在37℃中保温10分钟；（3）取20μl充分混匀的磁珠混合液加到离心管中，充分混匀，然后将离心管置入磁力架中，待磁珠被吸到管壁，吸出所有液体弃去；（4）加600μl洗