一种氧氟沙星半抗原制备方法及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106083890A(43)申请公布日2016.11.09(21)申请号201610513422.8G01N33/53(2006.01)(22)申请日2016.07.04(71)申请人北京明日达科技发展有限责任公司地址100095北京市海淀区地锦路9号院3号楼3层(72)发明人曹罡吴雨洋王照鹏刘薇秦誉覃丹凤(51)Int.Cl.C07D498/06(2006.01)C07K14/795(2006.01)C07K14/77(2006.01)C07K14/765(2006.01)C07K14/47(2006.01)C07K1/107(2006.01)C07K16/44(2006.01)G01N33/68(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图1页(54)发明名称一种氧氟沙星半抗原制备方法及其应用(57)摘要本发明公开了一种氧氟沙星半抗原和相应的人工抗原，同时本发明也公开了所述氧氟沙星半抗原和相应的人工抗原的制备方法及其应用。本发明提供的氧氟沙星半抗原是式1所示产物，用式1所示产物与载体蛋白连接可以得到氧氟沙星抗原。所述氧氟沙星抗原可应用于制备氧氟沙星特异性抗体。本发明制备方法简便可行、成本较低，半抗原产率较高。本发明的氧氟沙星人工抗原，通过免疫动物可产生针对氧氟沙星的特异性抗体，可用于制备检测氧氟沙星残留的酶联免疫检测试剂盒，具有简单、快速、处理样品量大、灵敏度高、特异性强等诸多优点。CN106083890ACN106083890A权利要求书1/1页1.一种氧氟沙星半抗原，为式1所示产物：式1。2.式1所示产物的制备方法，包括如下步骤：100ml圆底烧瓶中加入氧氟沙星原料药1000mg，DMF50ml，20-24℃磁力搅拌30-60min后加入NHS797.0mg，EDC1327.6mg，20-24℃磁力搅拌3-4小时后加入4-氨基丁酸乙酯盐酸盐696.0mg，20-24℃磁力搅拌反应过夜，将反应液滴加到300ml冰水中，搅拌30-40min析出类白色固体，过滤，滤饼用20ml水洗，收集滤饼50℃鼓风干燥5-6小时得到1052.6mg氧氟沙星4-氨基丁酸乙酯中间体；50ml圆底烧瓶中加入1052mg氧氟沙星4-氨基丁酸乙酯中间体，甲醇30ml，20-24℃磁力搅拌30-60min后滴加1M氢氧化钠水溶液6.0ml，20-24℃磁力搅拌3-4小时后35-40℃减压浓缩，残留物中加入20ml水，1M盐酸调PH到6.5-7，析出类白色固体，过滤，滤饼用10ml水洗，收集滤饼50℃鼓风干燥5-6小时得到840mg氧氟沙星4-氨基丁酸半抗原。3.一种氧氟沙星抗原，是将式1所示产物和载体蛋白偶联得到的偶联物。4.根据权利要求3所述的氧氟沙星抗原，其特征在于，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白，卵清蛋白，人血清白蛋白，鼠血清白蛋白，甲状腺蛋白或血蓝蛋白。5.权利要求3所述氧氟沙星抗原的制备方法，包括如下步骤：（1）将20mg氧氟沙星半抗原用1.5mlDMF溶解，200rpm搅拌10min，加入EDC21.5mg溶解后再加入NHS13mg，室温搅拌（500rpm）活化2-3h；（2）称取BSA50mg溶于3.5ml0.1M碳酸氢钠溶液中，200rpm搅拌10min，将步骤（1）反应液在<4℃冰浴1000rpm搅拌条件下，逐滴加入到BSA溶液中，500rpm搅拌反应24h；（3）将反应产物装入蒸馏水冲洗干净透析袋，1L0.01MpH7.2PBS，4℃100rpm搅拌透析3天，将透析产物5000rpm离心6min，1.5ml/管分装，将抗原编号，-20℃保存备用。6.权利要求3所述氧氟沙星抗原在制备氧氟沙星特异性抗体中的应用。7.应用权利要求3所述氧氟沙星抗原制备得到的特异性抗体。8.权利要求1所述产物、权利要求3所述氧氟沙星抗原、权利要求7所述抗体在检测氧氟沙星中的应用。9.应用权利要求1所述产物、权利要求3所述氧氟沙星抗原、权利要求7所述特异性抗体制备得到的酶联免疫检测试剂盒。10.权利要求9所述酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，它包括：包被有氧氟沙星抗原的酶标板、酶标抗体工作液、氧氟沙星系列标准品、底物显色液、终止液、浓缩复溶液、浓缩洗涤液。2CN106083890A说明书1/7页一种氧氟沙星半抗原制备方法及其应用技术领域[0001]本发明属于食品安全检测技术领域，具体涉及一种氧氟沙星半抗原、抗原制备方法及其应用。背景技术[0002]氧氟沙星（Ofloxacin），别名：氟洛沙星、氧洛沙星、奥氟哌酸，是一种人工合成的广谱抗菌药物。对葡萄球菌、链球菌（包括肠球菌)、肺炎链球菌、淋球菌、大肠杆菌、枸橼酸杆菌、志贺杆菌、肺炎克雷伯杆菌、肠杆菌属、沙雷杆菌属、变形杆菌、流感嗜血