一种酮康唑半抗原、人工抗原及其制备方法与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109305963A(43)申请公布日2019.02.05(21)申请号201710631811.5(22)申请日2017.07.28(71)申请人北京维德维康生物技术有限公司地址100095北京市海淀区北清路156号环保示范园9号院3号楼(72)发明人聂靖东秦誉吴雨洋(51)Int.Cl.C07D405/06(2006.01)C07K14/765(2006.01)C07K14/77(2006.01)C07K14/795(2006.01)C07K14/47(2006.01)C07K16/44(2006.01)G01N33/53(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图3页(54)发明名称一种酮康唑半抗原、人工抗原及其制备方法与应用(57)摘要本发明公开了一种酮康唑半抗原、人工抗原及其制备方法与应用。本发明所提供的酮康唑人工抗原为将式I所示的酮康唑半抗原与载体蛋白偶联所得的抗原。本发明所提供酮康唑人工抗原合成方法简单，纯度高和产率高，对于酮康唑抗体的制备，以及酮康唑药物残留检测具有重大价值。式I。CN109305963ACN109305963A权利要求书1/2页1.一种酮康唑半抗原，其结构如式I所示：式I。2.制备权利要求1所述化合物的方法，包括步骤为：乙酰酮康唑溶解于吡啶溶液，加入琥珀酸酐反应，获得反应液；所述乙酰酮康唑、吡啶、琥珀酸酐的配比为1000mg：25ml：411.52mg，所述反应温度为20-24℃，所述反应时间为5h；反应液在冰水中析出白色固体，过滤后的滤饼经25ml水洗、鼓风干燥得到式I所述的酮康唑半抗原1144.25mg；所述鼓风干燥的温度为50℃，时间为5-6小时。3.酮康唑抗原，为将权利要求1所述化合物与载体蛋白偶联所得的抗原。4.根据权利要求3所述的酮康唑抗原，其特征在于：所述载体蛋白可以是牛血清白蛋白、卵清蛋白、人血清白蛋白、血蓝蛋白、鼠血清蛋白、甲状腺蛋白或兔血清蛋白。5.权利要求3或4所述的酮康唑抗原的制备方法，包括如下步骤：将权利要求1所述化合物与载体蛋白通过酰胺键偶联，获得所述酮康唑抗原；权利要求1所述化合物与所述载体蛋白偶联的摩尔比为19.5：1。6.根据权利要求5所述的酮康唑抗原的制备方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：（1）将所述酮康唑半抗原（式I）溶解于二甲基甲酰胺（DMF）中，然后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），20-25℃磁力搅拌反应2-3h，得到溶液I；其中，所述酮康唑半抗原（式I）、所述二甲基甲酰胺（DMF）、所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）、所述N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）的配比为26.39mg：1.5mL：21.5mg：13mg；（2）将所述载体蛋白置于0.1M碳酸氢钠缓冲液中，200rpm搅拌10min，充分溶解，得到溶液II；所述载体蛋白与所述0.1M碳酸氢钠缓冲液的配比为33.6-50mg：3.5mL；（3）将所述溶液I和所述溶液II混合，具体为在0-4℃条件下，1000rpm搅拌下，将溶液I逐滴加入到所述溶液II中，500rpm搅拌反应24h，得到溶液III；（4）用磷酸盐缓冲液（0.01MPBS，pH7.2），于4℃对所述溶液III搅拌透析3天，得到所述酮康唑抗原。7.权利要求1所述化合物或权利要求3所述酮康唑抗原的应用，其特征在于定性或定量检测酮康唑；制备酮康唑抗体。8.利用权利要求3所述酮康唑抗原制备的抗体。9.根据权利要求7所述的酮康唑抗原的应用，其特征在于可以为制备酶联免疫试剂盒2CN109305963A权利要求书2/2页和胶体金检测卡。10.根据权利要求7或9所述的酮康唑抗原的应用，其特征在于检测样本可以为动物肉、组织及鸡蛋，所述检测上述样本中酮康唑的检测限为1μg/kg。3CN109305963A说明书1/9页一种酮康唑半抗原、人工抗原及其制备方法与应用技术领域[0001]本发明属于药物残留快速检测领域，涉及一种酮康唑人工抗原及其制备方法与应用。背景技术[0002]酮康唑（Ketoconazole，KCZ）为咪唑类抗真菌药，对隐球菌、着色真菌、念珠菌、球孢子菌、组织胞浆菌、皮炎芽生菌、毛发癣菌均具有抗菌活性，大剂量对曲霉菌、孢子丝菌也有作用，在体外，酮康唑对金黄葡萄球菌、放线菌、肠球菌等革兰氏阳性菌也有抗菌活性。在猪、牛、羊、鸡、宠物等动物养殖上作为抗真菌药广泛应用，但酮康唑具有一定毒性，有报道会造成肝胆系统损害、全身性损害、胃肠系统损害、中枢及外周神经系统损害、皮肤及其附件损害等。[0003]目前酮康唑的检测方法主要有高效液相色谱法、反相高效液相色谱法，虽然这些方法特异性强、