一种诺氟沙星半抗原制备方法及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106220563A(43)申请公布日2016.12.14(21)申请号201610517002.7(22)申请日2016.07.04(71)申请人北京明日达科技发展有限责任公司地址100095北京市海淀区地锦路9号院3号楼3层(72)发明人曹罡吴雨洋秦誉杨柳王照鹏谢冰(51)Int.Cl.C07D215/56(2006.01)C07K14/765(2006.01)C07K1/107(2006.01)C07K16/44(2006.01)G01N33/94(2006.01)G01N33/535(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图1页(54)发明名称一种诺氟沙星半抗原制备方法及其应用(57)摘要本发明公开了一种诺氟沙星半抗原和相应的人工抗原，同时本发明也公开了所述诺氟沙星半抗原和相应的人工抗原的制备方法及其应用。本发明提供的诺氟沙星半抗原是式1所示产物，用式1所示产物与载体蛋白连接可以得到诺氟沙星抗原。所述诺氟沙星抗原可应用于制备诺氟沙星特异性抗体。本发明制备方法简便可行、成本较低，半抗原产率较高。本发明的诺氟沙星人工抗原，通过免疫动物可产生针对诺氟沙星的特异性抗体，可用于制备检测诺氟沙星残留的酶联免疫检测试剂盒，具有简单、快速、处理样品量大、灵敏度高、特异性强等诸多优点。CN106220563ACN106220563A权利要求书1/1页1.一种诺氟沙星半抗原，为式1所示产物：式1。2.式1所示产物的制备方法，包括如下步骤：50ml圆底烧瓶中加入氯化亚砜10ml，20-24℃磁力搅拌下分批加入诺氟沙星原料药1000mg，50-60℃磁力搅拌3-4小时后50-55℃加压浓缩，残留物中加入10mlTHF溶解，得诺氟沙星酰氯中间体；50ml圆底烧瓶中加入4-氨基丁酸645.8mg，THF20ml，三乙胺1266.5mg，20-24℃磁力搅拌15-30min后滴加上步诺氟沙星酰氯中间体THF溶液10ml，20-24℃磁力搅拌3-4小时后35-40℃减压浓缩，残留物中加入30ml水，1M盐酸调PH到6.5-7，析出类白色固体，过滤，滤饼用10ml水洗，收集滤饼50℃鼓风干燥5-6小时得到850mg诺氟沙星4-氨基丁酸半抗原。3.一种诺氟沙星抗原，是将式1所示产物和载体蛋白偶联得到的偶联物。4.根据权利要求3所述的诺氟沙星抗原，其特征在于，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白，卵清蛋白，人血清白蛋白，鼠血清白蛋白，甲状腺蛋白或血蓝蛋白。5.权利要求3所述诺氟沙星抗原的制备方法，包括如下步骤：（1）将18.1mg诺氟沙星半抗原用1.5mlDMF溶解，200rpm搅拌10分钟，加入EDC21.5mg溶解后再加入NHS13mg，500rpm室温搅拌活化2-3小时；（2）称取BSA50mg溶于3.5ml0.1M碳酸氢钠溶液中，200rpm搅拌10min，使其充分溶解，将步骤（1）反应液于<4℃冰浴1000rpm搅拌条件下，逐滴加入BSA溶液，500rpm搅拌反应24小时；（3）将反应产物装入透析袋，1L0.01MpH7.2PBS，4℃100rpm搅拌透析3天，将透析产物5000rpm离心6min，-20℃保存备用。6.权利要求3所述诺氟沙星抗原在制备诺氟沙星特异性抗体中的应用。7.应用权利要求3所述诺氟沙星抗原制备得到的特异性抗体。8.权利要求1所述产物、权利要求3所述诺氟沙星抗原、权利要求7所述抗体在检测诺氟沙星中的应用。9.应用权利要求1所述产物、权利要求3所述诺氟沙星抗原、权利要求7所述特异性抗体制备得到的酶联免疫检测试剂盒。10.权利要求9所述酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，它包括：包被有诺氟沙星抗原的酶标板、酶标抗体工作液、诺氟沙星系列标准品、底物显色液、终止液、浓缩复溶液、浓缩洗涤液。2CN106220563A说明书1/7页一种诺氟沙星半抗原制备方法及其应用技术领域[0001]本发明属于食品安全检测技术领域，具体涉及一种诺氟沙星半抗原、抗原制备方法及其应用。背景技术[0002]诺氟沙星（Norfloxacin），别名：氟哌酸、淋克星，为第三代喹诺酮类抗菌药，其化学名称为1-乙基-6-氟-1,4-二氢-4-氧代-7-(1-哌嗪基)-3-喹啉羧酸。具广谱抗菌作用，尤其对需氧革兰阴性杆菌的抗菌活性高，对下列细菌在体外具良好抗菌作用：肠杆菌科的大部分细菌，包括枸椽酸杆菌属、阴沟肠杆菌、产气肠杆菌等肠杆菌属、大肠埃希菌、克雷伯菌属、变形菌属、沙门菌属、志贺菌属、弧菌属、耶尔森菌等。诺氟沙星体外对多重耐药菌亦具抗菌活性。对青霉素耐药的淋病奈瑟菌、流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌亦有良好抗菌作用。诺氟沙星为杀菌剂，通过作用于细菌DNA螺旋酶的A亚单位，抑制DNA的合成和复制而导致细