一种地塞米松半抗原制备方法及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106317153A(43)申请公布日2017.01.11(21)申请号201510340100.3C07K16/44(2006.01)(2006.01)(22)申请日2015.06.18G01N33/53(71)申请人北京维德维康生物技术有限公司地址100095北京市海淀区北清路156号中关村环保科技示范园地锦路9号院3号楼申请人重庆市动物疫病预防控制中心(72)发明人苏亮胡宇莉吴小平苏丽芳于书英温凯秦誉王文珺杨艳红陈银辉(51)Int.Cl.C07J5/00(2006.01)C07K14/765(2006.01)C07K14/77(2006.01)C07K14/795(2006.01)C07K14/47(2006.01)权利要求书1页说明书8页附图3页(54)发明名称一种地塞米松半抗原制备方法及其应用(57)摘要本发明公开了一种地塞米松半抗原和相应的人工抗原，同时本发明也公开了所述地塞米松半抗原和相应的人工抗原的制备方法及其应用。本发明提供的地塞米松半抗原是式1所示产物，用式1所示产物与载体蛋白连接可以得到地塞米松抗原。所述地塞米松抗原可应用于制备地塞米松特异性抗体。本发明制备方法简便可行、成本较低，半抗原产率较高。本发明的地塞米松人工抗原，通过免疫动物可产生了针对地塞米松的特异性抗体，可用于制备检测地塞米松残留的酶联免疫检测试剂盒，具有简单、快速、处理样品量大、灵敏度高、特异性强等诸多优点。CN106317153ACN106317153A权利要求书1/1页1.一种地塞米松半抗原，为式1所示产物：式1。2.式1所示产物的制备方法，包括如下步骤：50ml圆底烧瓶中加入地塞米松原料药500mg，5ml吡啶溶解后加入琥珀酸酐110mg，80℃反应3h，TLC检测原料反应完毕后处理，减压蒸除吡啶，残余物中加入10ml冰水，析出白色固体，过滤，水洗干燥得350mg产品，即是半抗原。3.一种地塞米松抗原，是将式1所示产物和载体蛋白偶联得到的偶联物。4.根据权利要求3所述的地塞米松抗原，其特征在于，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白，卵清蛋白，人血清白蛋白，鼠血清白蛋白，甲状腺蛋白或血蓝蛋白。5.权利要求3所述地塞米松抗原的制备方法，包括如下步骤：(1)、将半抗原22mg溶解于1.5mLDMF中，完全溶解后，依次加入EDC25mg，NHS25mg，室温磁力搅拌反应3h；(2)、称取50mgBSA，溶解于3.5mL0.1M碳酸缓冲液pH=9.6中，400rpm搅拌10min，充分溶解；(3)、取上述步骤1中活化溶液，在冰水浴环境下逐滴加入到蛋白溶液中，边加边搅拌，室温磁力搅拌反应24h；(4)、将反应产物装入1个蒸馏水冲洗干净透析袋（15cm），1LPBS透析3天，室温搅拌透析，每天更换透析液3次，透析产物4500rpm离心6min，0.5ml/管分装，将抗原编号，-20℃保存备用。6.权利要求3所述地塞米松抗原在制备地塞米松特异性抗体中的应用。7.应用权利要求3所述地塞米松抗原制备得到的特异性抗体。8.权利要求1所述产物、权利要求3所述地塞米松抗原、权利要求7所述抗体在检测地塞米松中的应用。9.应用权利要求1所述产物、权利要求3所述地塞米松抗原、权利要求7所述特异性抗体制备得到的酶联免疫检测试剂盒。10.权利要求8所述酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，它包括：包被有地塞米松抗原的酶标板、酶标抗体工作液、地塞米松系列标准品、底物显色液、终止液、浓缩复溶液、浓缩洗涤液。2CN106317153A说明书1/8页一种地塞米松半抗原制备方法及其应用技术领域[0001]本发明属于食品安全检测技术领域，具体涉及一种地塞米松半抗原、抗原制备方法及其应用。背景技术[0002]地塞米松(Dexamethasone,DSMS)又名氟美松、氟甲强地松龙、德沙美松，是一种人工合成的肾上腺皮质激素。是糖皮质类激素类抗炎、抗过敏药物，其药理作用主要是抗炎、抗毒、抗过敏、抗风湿，临床使用较广泛。此外，地塞米松还作为动物生长调节剂，促进动物蛋白质合成和代谢，增加产肉量，曾经被广泛应用作为家畜、家禽、使用。[0003]但通过长期的实验室研究发现，地塞米松可以使实验动物发生癌变和基因突变，地塞米松及其残留对人、畜均有明显的毒副作用，使用高剂量的地塞米松可导致肌肉萎缩、生长抑制等副作用。并由此推断，人类长期使用该类药物或长期食用添加该类促生长剂的家畜、家禽、同样也可发生癌变和基因突变。所以此类药物禁止在治疗和饲料中使用。[0004]我国于2002年在农业部发布的235号公告的《动物性食品中兽药最高残留限量》中，地塞米松在所有食品动物肌肉中不得超过0.75μg/kg，肝脏中不得超过2.0μg/kg。因此，为确