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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106075583A(43)申请公布日2016.11.09(21)申请号201610531693.6(22)申请日2016.07.07(71)申请人中国人民解放军第二军医大学地址200433上海市杨浦区翔殷路800号申请人上海卓阮医疗科技有限公司(72)发明人张剑(74)专利代理机构上海泰能知识产权代理事务所31233代理人黄志达魏峯(51)Int.Cl.A61L27/36(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图3页(54)发明名称一种采用灌注-压差法制备脱细胞基质生物材料的方法(57)摘要本发明涉及一种采用灌注-压差法制备脱细胞基质生物材料的方法,包括:(1)将原材料分离出粘膜下层或全层后接入灌注反应器,灌注消毒液同时超声振荡进行预灭菌;(2)依次向分离出的空腔内灌注细胞内容物清洗液和抗原封闭/清除液,利用渗透压差和/或液压差洗去细胞内容物、清除抗原;最终消毒灭菌、保存,即得。本发明可以显著缩短生化试剂的处理时间、降低生化试剂的使用浓度;明显提高了脱细胞基质生物材料中粘连蛋白类、生长因子类、蛋白聚糖类、糖蛋白类、葡糖胺基聚糖类等生物活性成分的保留量;同时力学强度保留好、脱细胞彻底,病毒等生物负载清除干净;工业化生产方便,具有良好的应用前景。CN106075583ACN106075583A权利要求书1/1页1.一种采用灌注-压差法制备脱细胞基质生物材料的方法,包括:(1)将原材料分离出粘膜下层或全层后接入灌注反应器,灌注消毒液同时超声振荡进行预灭菌;(2)依次向分离出的空腔内灌注细胞内容物清洗液和抗原封闭/清除液,利用渗透压差和/或液体压差洗去细胞内容物、清除抗原;最终消毒灭菌、保存,即得脱细胞基质生物材料。2.根据权利要求1所述的一种采用灌注-压差法制备脱细胞基质生物材料的方法,其特征在于:所述步骤(1)中的原材料为哺乳动物的空腔脏器。3.根据权利要求1所述的一种采用灌注-压差法制备脱细胞基质生物材料的方法,其特征在于:所述步骤(1)中的消毒液为醇与过氧化物、氧化性消毒剂或非氧化性消毒剂中的一种或几种;预灭菌的时间为1~5小时。4.根据权利要求1所述的一种采用灌注-压差法制备脱细胞基质生物材料的方法,其特征在于:所述步骤(2)中的细胞内容物清洗液为含盐缓冲液、碱性溶液、DNA增溶性缓冲盐溶液中的一种或几种;洗去细胞内容物的时间为0.1-16小时。5.根据权利要求1所述的一种采用灌注-压差法制备脱细胞基质生物材料的方法,其特征在于:所述步骤(2)中的抗原封闭/清除液为离子型表面活性剂溶液、非离子型表面活性剂溶液、酶类溶液中的一种或多种;清除抗原的时间为0.1-16小时。6.根据权利要求1所述的一种采用灌注-压差法制备脱细胞基质生物材料的方法,其特征在于:所述步骤(2)中的洗去细胞内容物、清除抗原之前还包括灌注脱脂溶剂进行脱脂处理。7.根据权利要求6所述的一种采用灌注-压差法制备脱细胞基质生物材料的方法,其特征在于:所述脱脂溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇、丙酮、氯仿中的一种或几种。8.根据权利要求1所述的一种采用灌注-压差法制备脱细胞基质生物材料的方法,其特征在于:所述步骤(2)中的消毒灭菌的方法为全反应器系统预灭菌、全程灭菌液体灌注、灌注消毒液、环氧乙烷灭菌、超临界CO2灭菌、等离子体处理、γ射线辐射灭菌中的一种或多种。9.根据权利要求1所述的一种采用灌注-压差法制备脱细胞基质生物材料的方法,其特征在于:所述步骤(2)中的保存为冷冻干燥保存或保存液保存。10.根据权利要求1所述的一种采用灌注-压差法制备脱细胞基质生物材料的方法,其特征在于:所述预灭菌、洗去细胞内容物、清除抗原、消毒灭菌后均进行灌注清洗,清洗方法为反复交替灌注去离子水、磷酸缓冲盐或生理盐水,辅助超声振荡。2CN106075583A说明书1/6页一种采用灌注-压差法制备脱细胞基质生物材料的方法技术领域[0001]本发明属于生物支架材料领域,特别涉及一种采用灌注-压差法制备脱细胞基质生物材料的方法。背景技术[0002]脱细胞技术制备的细胞外基质(Extracellularmatrix,ECM)成分生物材料是软组织修复材料的重要发展方向。相关产品在国外被广泛的用于各种创面,如代替脑膜、胸膜、血管、骨膜、心包、关节囊等,肝脾等实质脏器破损填塞止血、吻合口加强、膀胱悬吊、盆底重建以及各种复杂疝和腹壁缺损的治疗如伴有污染的腹壁缺损、合成补片植入后感染、肠瘘二次手术治疗、造口旁疝预防等。[0003]ECM是所有组织器官的组成部分,维持着各种组织器官的三维结构和储存营养物质,支撑着细胞赖生存、活动和变化。ECM作为组织修复和再生支架材料具有较多优势:①结构和组分接近自然,生物相容性佳:ECM的主