一种脱细胞基质生物材料的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114377206A(43)申请公布日2022.04.22(21)申请号202111595762.7(22)申请日2021.12.24(71)申请人杭州华迈医疗器械有限公司地址310051浙江省杭州市滨江区长河路475号和瑞科技园S2幢107室(72)发明人江涛李博冉永峰严洁李志宏(74)专利代理机构北京柏杉松知识产权代理事务所(普通合伙)11413代理人刘继富王春伟(51)Int.Cl.A61L27/36(2006.01)A61L27/58(2006.01)权利要求书1页说明书15页附图3页(54)发明名称一种脱细胞基质生物材料的制备方法(57)摘要本申请提供了一种脱细胞基质生物材料的制备方法，采用特定的前处理、脱脂、消毒、脱细胞、去α‑Gal抗原以及灭菌的方法相结合，在有效去除动物组织抗原性物质的同时，还能最大限度的保留材料中生物活性成分和结构的完整性，从而获得一种具有低免疫原性、高生物活性的脱细胞基质生物材料。此外，采用本申请的方法制备的脱细胞基质生物材料有效降低了免疫原成分，具有良好的生物相容性和生物安全性，表面有利于细胞粘附、聚集、增殖，其可以作为一种高活性的生物基质材料应用于皮肤软组织缺损、牙龈退缩及牙周软组织的修复。CN114377206ACN114377206A权利要求书1/1页1.一种脱细胞基质生物材料的制备方法，其包括以下步骤：前处理：用纯化水洗掉动物组织表层的残渣，将动物组织置于10～40wt％氯化钠溶液中，振荡1‑6h，再置于0.05～1wt％氯化钠溶液中，振荡12‑20h，利用物理刮除方式去除肌肉层、表皮层，获得基质材料，其中所述动物组织选自牛心包、猪心包、羊胃粘膜、猪腹膜、猪膀胱膜、猪小肠粘膜中的至少一种；脱脂：按照料液质量比1：5～20将所述基质材料与脱脂剂混合，振荡30‑180min；其中，所述脱脂试剂选自2～10wt％十二烷基磺酸钠溶液、0.1～1wt％氢氧化钠溶液、10～100wt％异丙醇溶液、20～80wt％正丙醇溶液、20～60wt％三氯甲烷和40～80wt％乙醇混合溶液、30～50wt％二氯甲烷和50～70wt％乙醇混合溶液或10～65wt％石油醚溶液的至少一种；消毒：按照料液质量比1：3～10将所述基质材料与消毒剂混合，振荡30‑180min；其中，所述消毒剂选自0.02～0.2wt％过氧乙酸与10～40wt％乙醇的混合溶液、0.02～0.2wt％过氧乙酸溶液、5～10wt％双氧水溶液、0.25～2.5wt％次氯酸钠溶液或者75～95wt％乙醇溶液；脱细胞：按照料液质量比1：3～10将所述基质材料与0.01～0.5wt％碱性蛋白酶溶液混合，振荡60‑240min；去α‑Gal抗原：选自反复冻融清洗、机械破碎清洗或用α‑半乳糖苷酶溶液清洗中的至少一种方式进行；灭菌：采用辐照灭菌或环氧乙烷灭菌的方式，对所述基质材料进行灭菌处理，获得所述脱细胞基质生物材料。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述去α‑Gal抗原的步骤为：按照料液质量体积比1：5～10将所述基质材料与0.25～5U/mLα‑半乳糖苷酶溶液混合，25‑37℃，振荡12‑48h。3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述碱性蛋白酶的浓度为0.01～0.2wt％。4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的脱脂、消毒、脱细胞及去α‑Gal抗原步骤完成后，各自还包括采用清洗剂进行清洗。5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述清洗剂选自0.1～1MPBS缓冲液、1～4mMHEPES缓冲液、0.1～1wt％氯化钠溶液、0.1～1wt％硫酸钠溶液或0.1～1wt％硝酸钾溶液中的至少一种。6.根据权利要求4所述的方法，其中，所述清洗步骤包括按照料液质量比1：3～10加入清洗剂，振荡10‑20min，中途换液、重复清洗1‑10次。7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述辐照灭菌为钴60辐照灭菌，辐照剂量为10‑40kGy，优选为20‑30kGy。8.根据权利要求1‑7中任一项所述的方法制备的脱细胞基质生物材料。9.根据权利要求8所述的脱细胞基质生物材料，其包含胶原蛋白、层粘连蛋白、糖胺聚糖和角蛋白中的一种或多种；其中，基于上述脱细胞基质生物材料的胶原蛋白的质量含量为90‑98wt％。10.根据权利要求9所述的脱细胞基质生物材料，其中，所述胶原蛋白包含胶原蛋白I、胶原蛋白III和胶原蛋白V中的一种或多种。2CN114377206A说明书1/15页一种脱细胞基质生物材料的制备方法技术领域[0001]本申请涉及生物医用材料技术领域，特别是涉及一种脱细胞基质生物材料的制备方法。背景技术[0002]脱细胞基质生物材料是用适当的方法将组织/器官进行脱细胞处理，去除组织中可能引起排