一种脱细胞真皮基质的制备方法及制得的脱细胞真皮基质.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107412868A(43)申请公布日2017.12.01(21)申请号201710682043.6(22)申请日2017.08.10(71)申请人广州润虹医药科技股份有限公司地址511356广东省广州市经济技术开发区永和经济区永盛路10号（6）栋第5层(72)发明人王慧玲车七石刘少辉(74)专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司11227代理人温可睿赵青朵(51)Int.Cl.A61L27/36(2006.01)A61L27/60(2006.01)A61L26/00(2006.01)权利要求书2页说明书8页附图3页(54)发明名称一种脱细胞真皮基质的制备方法及制得的脱细胞真皮基质(57)摘要本发明涉及组织工程技术领域，尤其涉及一种脱细胞真皮基质的制备方法及制得的脱细胞真皮基质。本发明提供的脱细胞真皮基质的制备方法能够将细胞成分去除干净，抗原性低，保留了真皮胶原结构，异源DNA含量极低，且具有良好的力学性能。CN107412868ACN107412868A权利要求书1/2页1.一种脱细胞真皮基质的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：灭毒断层皮片以脱脂剂脱脂后，经脱细胞液脱细胞，获得产物A；所述产物A以橄榄苦苷溶液交联后，依次经酒精漂洗、PBS溶液漂洗、干燥、辐照消毒，获得产物B；所述产物B以羧甲基壳聚糖溶液处理后，经水漂洗，获得产物C；所述产物C以戊二醛溶液浸泡后，经柔化、保湿处理、再以生理盐水漂洗、病毒灭活后，冻干制得脱细胞真皮基质；所述脱脂剂包括水和如下质量分数的：纯碱1.0％～4.0％；烧碱1.0％～4.0％；表面活性剂0.1％～1.0％；所述表面活性剂选自平平加、十二烷基氨基丙酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚或曲拉酮；所述脱细胞液包括水和如下质量分数的：胰酶0.1％～0.5％；激活剂0.1％～0.3％；脱脂剂0.2％～0.6％；所述激活剂为硫酸铵；所述脱脂剂为平平加或十二烷基硫酸钠溶液。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述脱脂的时间为30～60min；所述灭毒断层皮片与所述脱脂剂的质量比为1:4～7。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述脱细胞的时间为30～60min；经过脱脂的所述灭毒断层皮片与所述脱细胞液的质量比为1:4～7。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述交联采用的橄榄苦苷溶液中橄榄苦苷的质量分数为5％～10％；所述产物A与橄榄苦苷溶液的质量比为(1.5～5.0)：1；所述交联的温度为30～40℃；时间为48～72h。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述羧甲基壳聚糖溶液中羧甲基壳聚糖的质量分数为0.5％～2.5％；所述羧甲基壳聚糖溶液与产物B的质量比为(1.5～3.0)：1；所述处理的温度为25～45℃；所述处理包括：pH值5.5～6.0反应30min；pH值4.5～5.5反应60～90min；pH值6.5～7.0反应75～80min。6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述产物C以质量分数为0.2％～1％的戊二醛溶液浸泡，浸泡的温度为35～40℃，时间为15～30min。7.根据权利要求1～6任一项所述的制备方法，其特征在于，所述灭毒断层皮片的皮源来自猪。8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述灭毒断层皮片的制备方法包括：将猪皮制成厚度为0.1～2.0mm的断层皮片，然后依次经苯扎氯铵溶液浸泡、病毒灭活溶液浸泡制得灭毒断层皮片；所述病毒灭活溶液包括水和质量分数为0.1％～2.0％的过氧乙酸和质量分数为1.0％～5.0％的氯化钠。2CN107412868A权利要求书2/2页9.权利要求1～8任一项所述制备方法制得的脱细胞真皮基质。10.权利要求1～8任一项所述制备方法制得的脱细胞真皮基质在制备敷料中的应用。3CN107412868A说明书1/8页一种脱细胞真皮基质的制备方法及制得的脱细胞真皮基质技术领域[0001]本发明涉及组织工程技术领域，尤其涉及一种脱细胞真皮基质的制备方法及制得的脱细胞真皮基质。背景技术[0002]皮肤是覆盖、保护体表与内脏的重要组织器官，由于炎症、溃疡外伤、烧伤、肿瘤术后及先天性畸形等原因常造成皮肤的缺损与异常。对于这种组织缺损目前多采用自体皮片或皮瓣抑制，但这种方法不仅造成新的创伤缺损，还常常存在着供体来源限制。此外，移植物经常与移植部位临近的皮肤存在色泽、质地、功能上的差异。而异体或异种皮覆盖创面只是暂时性的，最终仍需要移植自体皮。并且，异体或异种皮还存在来源有限、价格昂贵和有传播病原微生物的可能性以及涉及伦理问题等。[0003]随着组织工程技术研究的深入，应用组织工程皮肤修复皮肤缺损是目前皮肤缺损修复研究的热点之一。脱细胞真皮基质(ace