一种脱细胞真皮基质材料的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112957534A(43)申请公布日2021.06.15(21)申请号202110366549.2(22)申请日2021.04.06(71)申请人海南大学地址570228海南省海口市美兰区人民大道58号海南大学食品科学与工程学院(72)发明人白新鹏王国锭(74)专利代理机构海南盛亿专利代理事务所(普通合伙)46005代理人吴燕梅(51)Int.Cl.A61L27/36(2006.01)A61L27/56(2006.01)权利要求书1页说明书3页附图1页(54)发明名称一种脱细胞真皮基质材料的制备方法(57)摘要本发明公开了一种脱细胞真皮基质材料的制备方法，属于生物材料制备技术领域，本发明利用生产加工的废弃物猪皮，经过脱细胞处理，制备出可以具有良好的稳定性和生物相容性的脱细胞真皮基质材料。本发明所制备的猪ADM材料呈现蜂窝状的多孔结构并且很好地保留了猪皮胶原的主要成分；所得到的猪ADM材料拉伸强度可达到2.06±0.48MPa，明显优于前人的研究数值0.28MPa，能够满足实际使用的更多需求；所制备的猪ADM材料无细胞毒性且具有较高的孔隙率，有利于细胞黏附和营养的交换，对细胞的增长繁殖表现出明显的促进效果。CN112957534ACN112957534A权利要求书1/1页1.一种脱细胞真皮基质材料的制备方法，其特征在于，它包括以下步骤：S1.去皮：取猪皮，刮去表面的毛发，切取具有一定厚度且含表皮的真皮基质，同时去除脂肪组织；S2.浸泡：将去皮后的真皮基质浸泡在含有氨基酸的乙醛溶液中1‑2h，所述溶液体积与真皮基质质量的比值为2:1；S3.脱细胞：将浸泡后的真皮基质置于洗脱液中进行洗脱，所述洗脱的温度为37℃，洗脱时间为4h，洗脱次数为4次；所述洗脱液为NaOH、TritonX‑100与SDS的混合物；S4.后处理：将脱细胞真皮基质进行干燥和灭菌。2.根据权利要求1所述的一种脱细胞真皮基质材料的制备方法，其特征在于，步骤S1中所述真皮基质的厚度为0.1‑3mm。3.根据权利要求1所述的一种脱细胞真皮基质材料的制备方法，其特征在于，步骤S2中所述的氨基酸为甘氨酸，甘氨酸的质量百分比浓度为4‑5％。4.根据权利要求1所述的一种脱细胞真皮基质材料的制备方法，其特征在于，步骤S3中所述洗脱液与真皮基质的料液比为10mg:1mL。5.根据权利要求1所述的一种脱细胞真皮基质材料的制备方法，其特征在于，步骤S3中所述NaOH的质量百分比浓度为2％，TritonX‑100的质量百分比浓度为2％，SDS的质量百分比浓度为0.5％。2CN112957534A说明书1/3页一种脱细胞真皮基质材料的制备方法技术领域[0001]本发明属于生物材料制备技术领域，具体涉及一种脱细胞真皮基质材料的制备方法。背景技术[0002]在过去的30年中，全球已经开发了许多先进的伤口敷料，尤其是对天然聚合物(包括橡胶，纤维素和胶原蛋白)的使用进行了广泛的研究，这些天然聚合物具有良好的生物相容性、可降解性和保水性等功能。其中胶原蛋白是最丰富的动物蛋白，它为生物组织提供机械强度，加速细胞增殖。目前商用型的胶原敷料大多由牛和猪的组织制备，胶原支架的制备可以通过脱细胞进行，通常称为脱细胞真皮基质。脱细胞真皮基质是一种特殊类型的生物材料，其中来自皮肤组织的高免疫原性细胞成分已被去除，同时还保留了细胞外基质和基底膜，以及真皮组织的完整三维空间结构。Wainwright和Livesey等人率先开展了关于脱细胞真皮基质方面的研究，研究发现脱细胞真皮基质材料治疗深度烧伤引起的伤口时会表现出低免疫原性，并可诱导宿主细胞成纤维细胞的浸润、新血管的形成和上皮组织的形成。随后的研究表明，脱细胞真皮基质材料表现出良好的组织相容性；这是因为这种材料不包含通常引起移植免疫排斥的细胞成分和抗原成分(主要组织相容性复合体1类和2类)。此外，由于保留了真皮组织的三维结构(主要包含I型胶原)，脱细胞真皮基质材料可作为优良的组织支架促进宿主细胞植入和新生血管形成。得益于独特的材料结构和优异的生物学特性，通常用于修复组织缺损。同时，脱细胞真皮基质材料具有一定耐受感染能力，这也有利于组织的修复。[0003]猪脱细胞真皮基质(猪ADM)是将猪皮经过脱细胞等工艺处理除去免疫成分后，保留细胞外基质的主要成分及低免疫原性的一种潜在的重要生物医用材料。目前常用的脱细胞方法有物理法、化学法、酶法、有机溶剂这四种方法，在处理过程中都会造成真皮基质结构不同程度的损伤、降解基质中的活性因子，导致材料机械强度差、热稳定性不足、生物相容性差，因此，最大程度的维持真皮基质三维结构稳定性和保留蛋白聚糖、生长因子等生物活性成分的脱细胞方法是目前研究的热点和难点。发明内