一种肿瘤抗原的制备方法及其制备的肿瘤抗原.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106366175A(43)申请公布日2017.02.01(21)申请号201610860271.3(22)申请日2016.09.28(71)申请人诺莱生物医学研究院（北京）有限公司地址100083北京市海淀区花园北路35号9号楼4层405(72)发明人顾宇春(74)专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司11227代理人赵青朵(51)Int.Cl.C07K14/47(2006.01)A61K39/00(2006.01)A61P35/00(2006.01)权利要求书1页说明书6页(54)发明名称一种肿瘤抗原的制备方法及其制备的肿瘤抗原(57)摘要本发明涉及细胞免疫技术领域，尤其涉及一种肿瘤抗原的制备方法及其制备的肿瘤抗原。该方法将分离培养的肿瘤细胞与腺病毒共同培养后，弃除沉淀，截留分子量小于30kDa的蛋白。本发明提供方法制得的肿瘤抗原纯度较高，浓度较大，经检测，其中肿瘤抗原的浓度大于0.5mg/ml。经试验证实，本发明提供方法制备的肿瘤抗原具有更好的免疫原性，与传统方法制备的抗原相比，其能够使肝癌大鼠的肿瘤体积缩小至原体积的约1/3，使乳腺癌大鼠的肿瘤体积缩小至原体积的1/3，该效果显著优于(p<0.05)现有技术制备的抗原。CN106366175ACN106366175A权利要求书1/1页1.腺病毒在制备肿瘤抗原中的应用；所述腺病毒为重组人p53腺病毒或重组人5型腺病毒。2.一种肿瘤抗原的制备方法，其特征在于，将分离培养的肿瘤细胞与腺病毒共同培养后，弃除沉淀，截留分子量小于30kDa的蛋白，制得肿瘤抗原；所述腺病毒为重组人p53腺病毒或重组人5型腺病毒。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述腺病毒为重组人p53腺病毒。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述共同培养中，1.0×1011腺病毒滴度与1000万肿瘤细胞共培养。5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述共同培养的时间为36h～60h。6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述肿瘤细胞为肝肿瘤细胞或乳腺肿瘤细胞。7.权利要求2～6任一项所述制备方法制得的肿瘤抗原。8.权利要求2～6任一项所述制备方法制得的肿瘤抗原在制备肿瘤疫苗中的应用。9.一种抗肿瘤疫苗，其特征在于，包括权利要求2～6任一项所述制备方法制得的肿瘤抗原和生理盐水，所述肿瘤抗原的浓度为0.5mg/mL。10.一种DC抗肿瘤疫苗，其特征在于，以权利要求2～6任一项所述制备方法制得的肿瘤抗原刺激DC细胞制得。2CN106366175A说明书1/6页一种肿瘤抗原的制备方法及其制备的肿瘤抗原技术领域[0001]本发明涉及细胞免疫技术领域，尤其涉及一种肿瘤抗原的制备方法及其制备的肿瘤抗原。背景技术[0002]细胞生物治疗是运用自身免疫系统的新型癌症治疗方法，具有显著疗效的治疗模式。它运用分子生物学技术和细胞工程学技术，用生物制剂对从病人体内采集的免疫细胞在体外进行培养和扩增，再回输到病人体内，从而激发、增强机体自身的免疫功能，达到监视并杀灭病变细胞或修复受损细胞的目的。[0003]对于健康人来说，其免疫系统的强大足以及时清除突变的细胞、修复受损细胞。而当人体的免疫功能低下或紊乱时，就会导致各种疾病甚至诱发肿瘤。癌症病人因为自身免疫系统缺陷或功能衰退，使自身无法识别和清除癌细胞，给癌细胞的蔓延生长以可趁之机，影响人体正常机体功能，甚至导致器官的坏死和衰竭。[0004]肿瘤抗原的有效性取决于它的制备方法。肿瘤抗原一般来源于自体或异体肿瘤细胞或其粗提取物，带有肿瘤特异性抗原(tumorspecificantigen，TSA)或肿瘤相关抗原(tumorassociatedantigen，TAA)。虽然有肿瘤抗原多肽库，但肿瘤细胞容易通过抗原变异逃避针对单一抗原表位的免疫作用，因此肿瘤细胞和肿瘤是理想的抗原来源。[0005]目前常见的肿瘤抗原的制备方法大致如下：将手术中切除的肿瘤组织剪碎，碾磨，过筛后分离出肿瘤细胞。然后将肿瘤细胞加热灭活，然后经过多次-80℃冷冻和37℃融化，这种反复冻融从而破碎细胞。冻融液离心后，取上清中的蛋白，作为肿瘤抗原。该法制备的肿瘤抗原，蛋白经过变性，特异性抗原容易丢失，其次，无法保证肿瘤细胞的碎片大小，过大的细胞碎片不利于DC细胞的致敏。发明内容[0006]有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种肿瘤抗原的制备方法及其制备的肿瘤抗原，本发明提供的抗原具有更好的免疫原性。[0007]本发明提供了腺病毒在制备肿瘤抗原中的应用；腺病毒为重组人p53腺病毒或重组人5型腺病毒。[0008]在本发明的实施例中，腺病毒为重组人p53腺病毒。[0009]腺病毒载体系统可广泛用于人类及非人类