一种雌酮抗原及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112625119A(43)申请公布日2021.04.09(21)申请号202011338549.3(22)申请日2020.11.25(71)申请人杭州隆基生物技术有限公司地址311100浙江省杭州市余杭区余杭街道义创路1号(72)发明人曾繁荣郑曙剑(74)专利代理机构杭州杭诚专利事务所有限公司33109代理人尉伟敏(51)Int.Cl.C07K14/765(2006.01)C07K14/795(2006.01)C07K14/77(2006.01)C07K14/47(2006.01)权利要求书2页说明书9页(54)发明名称一种雌酮抗原及其制备方法(57)摘要本发明涉及生物化工技术领域，公开了一种雌酮抗原及其制备方法。该雌酮抗原的制备方法包括以下步骤：a）以雌酮为原料，与4‑氨基丁酸进行缩合反应并还原后，得到3‑羟基雌甾‑1,3,5(10)‑三烯‑17‑氨基丁酸；b）将步骤a）得到的产物用三氟乙酸酐保护羟基与仲胺基后，得到3‑三氟乙酰氧基雌甾‑1,3,5(10)‑三烯‑17‑(N‑三氟乙酰基)氨基丁酸；c）将步骤b）得到的产物与载体蛋白偶联，脱去保护基后，得到雌酮抗原。本发明的雌酮抗原比较完整地保留了雌酮的分子结构以及活性基团羟基，因而具有较强的特异性和较高的灵敏度。CN112625119ACN112625119A权利要求书1/2页1.一种雌酮抗原，其特征在于，其结构式为：其中，R为载体蛋白。2.一种如权利要求1所述雌酮抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a）以雌酮为原料，与4‑氨基丁酸进行缩合反应并还原后，得到3‑羟基雌甾‑1,3,5(10)‑三烯‑17‑氨基丁酸；b）将步骤a）得到的产物用三氟乙酸酐保护羟基与仲胺基后，得到3‑三氟乙酰氧基雌甾‑1,3,5(10)‑三烯‑17‑(N‑三氟乙酰基)氨基丁酸；c）将步骤b）得到的产物与载体蛋白偶联，脱去保护基后，得到雌酮抗原。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤a）的具体过程如下：将雌酮和4‑氨基丁酸溶于有机溶剂中，加入缩合反应催化剂，在60‑80℃下反应10‑24h；降至10‑30℃后，加入硼氢化钠，在10‑30℃下反应10‑24h后，分离产物，得到3‑羟基雌甾‑1,3,5(10)‑三烯‑17‑氨基丁酸。4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤a）中：所述雌酮与4‑氨基丁酸的质量比为1.8‑2.8:1；和/或所述缩合反应催化剂为对甲基苯磺酸，所述缩合反应催化剂与雌酮的质量比为1:25‑35；和/或所述硼氢化钠与雌酮的质量比为1:5‑6，所述硼氢化钠分批次加入。5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤b）的具体过程如下：将步骤a）得到的产物溶于反应溶剂中，加入三氟乙酸酐后，在10‑60℃下反应，分离产物，得到3‑三氟乙酰氧基雌甾‑1,3,5(10)‑三烯‑17‑(N‑三氟乙酰基)氨基丁酸。6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤b）中：所述在10‑60℃下反应的具体过程如下：先在50℃下反应1h，再室温反应15h；和/或所述步骤a）得到的产物与三氟乙酸酐的质量体积比为1‑1.5g:1mL。7.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤c）中，偶联的具体过程如下：将步骤b）得到的产物溶于偶联溶剂中，加入N‑羟基丁二酰亚胺和二环己基碳二亚胺，在15‑30℃下反应12‑18h后，离心取上清液，加入到载体蛋白的PBS溶液中，在4‑20℃下反应13‑18h。8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤c）中，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、血蓝蛋白、鸡卵白蛋白、牛丙种球蛋白中的一种。2CN112625119A权利要求书2/2页9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤c）中，所述载体蛋白为牛血清白蛋白，所述步骤b）得到的产物、N‑羟基丁二酰亚胺、二环己基碳二亚胺、载体蛋白的质量比为1:0.21‑0.24:0.37‑0.39:0.8‑1。10.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤c）中，脱去保护基的具体过程如下：将偶联反应后获得的反应液pH调节至11.5‑12.5后，置于pH为11.5‑12.5的氢氧化钠的PBS溶液中透析20‑24h，再置于pH为7.4的PBS溶液中透析70‑72h，期间每20‑24h更换PBS溶液一次。3CN112625119A说明书1/9页一种雌酮抗原及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及生物化工技术领域，尤其涉及一种雌酮抗原及其制备方法。背景技术[0002]雌酮(Estrone)又名雌素酮，学名“3‑羟雌甾‑1,3,5(10)‑三烯‑17‑酮”，其结构式如下：雌酮是一种甾体激素类化合物，具有环戊烷并多氢菲母核，为天然内源性雌激素，可