酚酞半抗原、人工抗原及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106831534A(43)申请公布日2017.06.13(21)申请号201710096284.2(22)申请日2017.02.22(71)申请人广东工业大学地址510062广东省广州市越秀区东风东路729号大院(72)发明人卢宇靖蔡森源郭晓路黄宝华张焜(74)专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司11227代理人赵青朵(51)Int.Cl.C07D209/46(2006.01)C07K14/765(2006.01)C07K1/107(2006.01)权利要求书2页说明书10页附图1页(54)发明名称酚酞半抗原、人工抗原及其制备方法(57)摘要本发明涉及生物技术领域，特别涉及酚酞半抗原、人工抗原及其制备方法。本发明半抗原在保留酚酞基本结构的基础上引入连接臂结构和用于偶联大分子的活性基团，这样既有利于其与大分子偶联，又可以在偶联后充分暴露本身分子结构和分子量较小的酚酞基本结构，避免了其被大分子掩蔽而影响动物机体的识别。本发明通过活性酯化法将半抗原与蛋白质偶联制备人工抗原，偶联比可达18.2，可用于酚酞的免疫检测。CN106831534ACN106831534A权利要求书1/2页1.一种酚酞半抗原，其特征在于，其分子结构式如式I或式II所示：其中，n为1、2或3，m为1、2或3。2.如式I所示酚酞半抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：酚酞与脂肪类二胺反应，得到酚酞半抗原；所述脂肪类二胺为乙二胺、丙二胺或丁二胺。3.如式II所示酚酞半抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：酚酞与脂肪类二胺反应，得到氨基化酚酞；所述氨基化酚酞与环状酸酐反应，得到酚酞半抗原；所述脂肪类二胺为乙二胺、丙二胺或丁二胺；所述环形酸酐为丁二酸酐、戊二酸酐或己二酸酐。4.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，所述酚酞与脂肪类二胺反应的温度为120～130℃，反应的时间为12～14h。5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述氨基化酚酞与环形酸酐反应的溶剂为DMF，反应的条件为弱碱性、密闭条件、40～50℃下反应10～12h。6.一种酚酞人工抗原，其特征在于，其分子结构式如式III或式IV所示：2CN106831534A权利要求书2/2页其中，n为1、2或3，m为1、2或3。7.如权利要求6所述酚酞人工抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将权利要求1所述的酚酞半抗原、EDC、NHS在有机溶剂中反应，得到一号反应液；将载体蛋白与磷酸缓冲液混合，得到二号反应液；所述一号反应液与所述二号反应液反应，得到所述酚酞人工抗原。8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为DMF。9.根据权利要求7或8所述的制备方法，其特征在于，所述将酚酞半抗原、EDC、NHS在有机溶剂中反应的条件为15～30℃、避光条件下搅拌反应12～14h。10.根据权利要求7至9中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述一号反应液与二号反应液反应具体为：将一号反应液滴入二号反应液，在15～30℃、避光条件下搅拌反应30～60min，然后在3～5℃、避光条件下搅拌反应46～50h。3CN106831534A说明书1/10页酚酞半抗原、人工抗原及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，特别涉及酚酞半抗原、人工抗原及其制备方法。背景技术[0002]酚酞(Phenolphthalein)，3,3-双(4-羟基苯基)-1(3H)-异苯并呋喃酮，可作用于肠平滑肌，使肠蠕动增加，同时又能抑制肠道内水分的吸收，使水和电解质在结肠蓄积，产生缓泻作用，临床常用于治疗习惯性顽固性便秘。其作用缓和，很少引起肠道痉挛。但酚酞具有一定的不良反应，包括：由酚酞引起的过敏反应临床上罕见，偶能引起皮炎、药疹、瘙痒、灼痛及肠炎、出血倾向等。禁忌症包括阑尾炎、直肠出血未明确诊断、充血性心力衰竭、高血压、粪块阻塞、肠梗阻。药物过量或长期滥用时可造成电解质紊乱，诱发心律失常、神志不清、肌痉挛以及倦怠无力等症状。[0003]近年来，减肥类中药或保健品中非法添加酚酞以达到临床的疗效的新闻屡见报道。如果患者在长期不知情的情况下服用含有酚酞的中成药或保健品会引起严重的副作用。因此，急需开发快速准确的酚酞检测手段和方法用于监管执法和科学研究。目前，检测中成药或保健品中是否含有酚酞成分，采用的是传统的检验方法，须将提取的样品带回实验室进行大型仪器分析耗时长，成本高。[0004]免疫分析是一种基于抗原抗体特异性识别和结合反应的分析方法，具有灵敏、对仪器要求不高、操作简单、成本低等优点。酚酞属于分子量小于1000的小分子化合物，本身不具备反应性和免疫原性，为了实现酚酞的免疫检测，不仅需要合成具备高效价的酚酞抗原，而且还需要筛