一种免疫磁珠及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106405075A(43)申请公布日2017.02.15(21)申请号201610780209.3(22)申请日2016.08.31(71)申请人上海美吉生物医药科技有限公司地址201321上海市浦东新区国际医学园区康新公路3399弄3号楼(72)发明人刘关蔡红东陈昌岳张培培张祥林(51)Int.Cl.G01N33/543(2006.01)G01N33/531(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图2页(54)发明名称一种免疫磁珠及其制备方法(57)摘要本发明提供了一种免疫磁珠及其制备方法，包括磁性微球和生物配基，所述免疫磁珠的结构由内至外为：磁性微球-生物素-链霉亲和素-生物素-生物配基。本发明的免疫磁珠性质稳定，而且磁性好，粒径小。本发明采用生物素-链霉亲和素-生物素的连接方式，先通过酰胺化反应得到生物素化磁性微球，然后将生物素化磁性微球与链霉亲和素结合。由于生物素-链霉亲和素的结合具有亲和性高和特异性的特点，使磁性微球与生物配基可以定向结合，不易交联，不易引起链霉亲和素结构改变。同时，本发明的制备方法简单，反应条件温和，使生物配基可以保留生物活性。CN106405075ACN106405075A权利要求书1/1页1.一种免疫磁珠，包括磁性微球和生物配基，其特征在于：所述免疫磁珠的结构由内至外为：磁性微球-生物素-链霉亲和素-生物素-生物配基。2.根据权利要求1所述的免疫磁珠，其特征在于：所述生物配基层为BSA、酶、抗体、DNA或RNA中的一种。3.根据权利要求1所述的免疫磁珠，其特征在于：所述磁性微球为核壳结构的无机或有机高分子包裹的磁性纳米簇。4.一种制备权利要求1-3中任一项所述免疫磁珠的方法，其步骤包括：s1.磁性纳米簇的制备；s2.氨基修饰的磁性微球的制备；s3.生物素化磁性微球的制备；s4.将生物素化磁性微球与链霉亲和素结合；s5.免疫磁珠的制备：将步骤s4中结合了链霉亲和素的生物素化磁性微球与生物素化生物配基结合得到所述免疫磁珠。5.根据权利要求4所述免疫磁珠的制备方法，其特征在于：所述步骤s3中的生物素化磁性微球的制备是将氨基修饰的磁性微球分散在二甲亚砜或N,N-二甲基甲酰胺中，然后加入生物素活性酯，进行酰胺化反应后得到的，其中氨基修饰的磁性微球和生物素活性酯的质量比为1:(0.25～1)。6.根据权利要求4所述免疫磁珠的制备方法，其特征在于：所述步骤s4是将生物素化磁性微球与链霉亲和素在室温下反应60～90分钟后得到，其中链霉亲和素的添加量为生物素化磁性微球质量的0.1～0.6。7.根据权利要求4所述免疫磁珠的制备方法，其特征在于：所述步骤s5中步骤s4中结合了链霉亲和素的生物素化磁性微球与生物素化生物配基的质量比为1：(0.01～1)。8.根据权利要求4所述免疫磁珠的制备方法，其特征在于：所述步骤s1中的磁性纳米簇是通过水热法、溶剂热法或共沉淀法制备得到。9.根据权利要求4所述免疫磁珠的制备方法，其特征在于：所述步骤s2中的氨基修饰的磁性微球为核壳结构的二氧化硅包裹的磁性纳米簇，通过如下方法制备得到：向含有磁性纳米簇的溶液中加入氨水、硅烷化试剂和氨基硅烷偶联剂，反应1～3天后得到氨基修饰的磁性微球；所述磁性纳米簇、氨水、硅烷化试剂、氨基硅烷偶联剂加入量的质量比为：1:(12.5～40):(2～8):(0.5～3)。10.一种权利要求1所述免疫磁珠在细胞分选中的应用。2CN106405075A说明书1/5页一种免疫磁珠及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及免疫磁珠的制备领域，具体地说是一种免疫磁珠及其制备方法。背景技术[0002]免疫磁珠(Immonumagneticbeads，简称IMB)，是由磁性微球和生物配基结合而成。磁性微球与生物配基的结合一般有物理结合和化学偶联的方法。化学偶联法具有结合容量大，稳定性好，制备得到的免疫磁珠通常可以保存数月。但是为了防止抗体失活，化学偶联法一般只能使用比较温和的条件，因此会导致抗体的包被效率不佳；而且化学偶联会利用过多的抗体活性基团，可控度低因而会导致抗体失活。物理吸附方法是最早被JohnUgelstad等采用的方法，具有包被简单，反应条件温和的特点，但是其主要利用蛋白的疏水性在磁性微球表面进行包被，磁性微球在包被之前必须具有疏水性，免疫磁珠保存时间不能太长，磁珠表面活性物质易脱落，蛋白稳定性和活性会受到影响。[0003]通过生物素-亲和素化磁珠的结合来制备免疫磁珠是目前最常用的亲和性高的物理结合包被方式，其反应快速，产物稳定，专一性强，克服了一般物理吸附的缺点，又具有高的亲和性，可以维护生物基质的活性以及特异性。亲和素本身背景高，常用的物理结合包括生物素-链霉亲和素连接的方