一种凝胶化免疫磁珠及其制备方法与用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112034159A(43)申请公布日2020.12.04(21)申请号202010925008.4(22)申请日2020.09.06(71)申请人武汉生之源生物科技股份有限公司地址430000湖北省武汉市东湖开发区高新大道818号高科医疗器械园B11号1楼、2楼、3楼(72)发明人王铎来祥兵李重阳舒芹张雪娇(74)专利代理机构北京众达德权知识产权代理有限公司11570代理人江慧(51)Int.Cl.G01N33/531(2006.01)G01N33/543(2006.01)G01N21/76(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图2页(54)发明名称一种凝胶化免疫磁珠及其制备方法与用途(57)摘要本发明公开了一种凝胶化免疫磁珠及其制备方法与用途，将氨基磁珠和明胶在二酐类有机酸酐引发剂的作用下反应，获得磁性明胶微球；使用NHS溶液、EDC溶液和AEM将所述磁性明胶微球进行活化，获得马来酰胺化的磁性明胶微球溶液；获得活化抗体溶液；将所述马来酰胺化的磁性明胶微球溶液与所述活化抗体溶液进行偶联反应，获得偶联反应液；将所述偶联反应液进行封闭，后进行磁分离获得固体，将所述固体使用保存缓冲液重悬后，获得凝胶化免疫磁珠；本发明的凝胶化免疫磁珠能够提高抗体的接枝率及保留抗体的活性，该免疫磁珠应用到化学发光免疫分析项目中，从而提高项目的灵敏度及稳定性。CN112034159ACN112034159A权利要求书1/2页1.一种凝胶化免疫磁珠的制备方法，其特征在于，所述方法包括：将氨基磁珠和明胶在二酐类有机酸酐引发剂的作用下反应，获得磁性明胶微球；使用NHS溶液、EDC溶液和AEM将所述磁性明胶微球进行活化，获得马来酰胺化的磁性明胶微球溶液；获得活化抗体溶液；将所述马来酰胺化的磁性明胶微球溶液与所述活化抗体溶液进行偶联反应，获得偶联反应液；将所述偶联反应液进行封闭，后进行磁分离获得固体，将所述固体使用保存缓冲液重悬后，获得凝胶化免疫磁珠。2.根据权利要求1所述的一种凝胶化免疫磁珠的制备方法，其特征在于，所述二酐类有机酸酐包括丁烷羧酸二酐、环丁烷四甲酸二酐、环戊烷四羧酸二酐、均苯四甲酸二酐、双环己基-3,4,3',4'-四酸二酐和4,4'-二邻苯二甲酸酐中的一种。3.根据权利要求1所述的一种凝胶化免疫磁珠的制备方法，其特征在于，所述将氨基磁珠和明胶在二酐类有机酸酐引发剂的作用下反应，获得磁性明胶微球，具体包括：使用交联缓冲液A将氨基磁珠进行清洗，磁分离后获得沉淀，后使用所述交联缓冲液A将所述沉淀重悬获得氨基磁珠溶液；将所述氨基磁珠溶液加入明胶混匀获得混合溶液，后所述混合溶液中加入二酐类有机酸酐引发剂进行反应，磁分离后获得磁性明胶微球。4.根据权利要求3所述的一种凝胶化免疫磁珠的制备方法，其特征在于，所述交联缓冲液A为磷酸盐缓冲液、HEPES缓冲液、碳酸盐缓冲液、MES缓冲液和硼酸缓冲液中的一种或多种；所述氨基磁珠溶液中氨基磁珠的浓度为0.5％～1.5％；所述明胶的终浓度为1％～4％；所述二酐类有机酸酐引发剂的终浓度为0.001％～0.1％。5.根据权利要求1所述的一种凝胶化免疫磁珠的制备方法，其特征在于，所述使用NHS溶液、EDC溶液和AEM将所述磁性明胶微球进行活化，获得马来酰胺化的磁性明胶微球溶液，具体包括：将所述磁性明胶微球分散在交联缓冲液B中，获得磁性明胶微球溶液；将所述磁性明胶微球溶液加入NHS溶液和EDC溶液，混匀后加入AEM进行活化反应获得活化溶液，将所述活化溶液磁清洗后使用所述交联缓冲液B重悬，获得马来酰胺化的磁性明胶微球溶液。6.根据权利要求5所述的一种凝胶化免疫磁珠的制备方法，其特征在于，所述NHS溶液和所述EDC溶液的终浓度均为0.01％～0.1％；所述AEM的终浓度为0.01％～1％；所述磁性明胶微球溶液的浓度为0.5％～2％。7.根据权利要求1所述的一种凝胶化免疫磁珠的制备方法，其特征在于，所述获得活化抗体溶液，包括：将抗体使用交联缓冲液B稀释至终浓度为0.1％～0.5％，混匀后加入终浓度为0.1％～0.5％Traut’s试剂，获得活化抗体溶液，其中所述交联缓冲液B为磷酸盐缓冲液、HEPES缓冲液、碳酸盐缓冲液、MES缓冲液和硼酸缓冲液中的一种或多种。8.根据权利要求1所述的一种凝胶化免疫磁珠的制备方法，其特征在于，所述马来酰胺化的磁性明胶微球溶液与所述活化抗体溶液的体积比为(8～12)：1。2CN112034159A权利要求书2/2页9.一种权利要求1-8任一所述方法制备得到的凝胶化免疫磁珠。10.权利要求9所述的凝胶化免疫磁珠在制备化学发光免疫试剂盒中的用途。3CN112034159A说明书1/9页一种凝胶化免疫磁珠及其制备方法与用途技术