克拉霉素衍生物及其制备方法与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106588857A(43)申请公布日2017.04.26(21)申请号201611125984.1C07K14/795(2006.01)(22)申请日2016.12.09C07K16/44(2006.01)C07K16/06(2006.01)(71)申请人深圳市绿诗源生物技术有限公司G01N33/543(2006.01)地址518000广东省深圳市大鹏新区大鹏办事处布新社区布新村工业大道2号D栋101.201.301(72)发明人宁波李隆军刘明如赖启隆朱永利何秀平黄斌(74)专利代理机构广州市越秀区海心联合专利代理事务所(普通合伙)44295代理人王海曼(51)Int.Cl.C07D313/00(2006.01)C07K14/765(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图2页(54)发明名称克拉霉素衍生物及其制备方法与应用(57)摘要本发明公开了一种克拉霉素衍生物及其制备方法与应用，旨在提供既能最大程度保留了克拉霉素的特征结构，又具有可以与载体蛋白发生偶联的活性基团的克拉霉素衍生物，并且以该克拉霉素衍生物制备人工抗原和抗体，用来检测检测大环内酯类化合物中，其技术方案，所述克拉霉素衍生物，所述结构如下式所示：所述克拉霉素人工抗原为所述克拉霉素衍生物与载体蛋白偶联制得的；属于生物技术领域；CN106588857ACN106588857A权利要求书1/2页1.一种克拉霉素衍生物，其特征在于，所述结构如式I所示：2.制备权利要求1所述克拉霉素衍生物的方法，其特征在于，依次包括下述步骤包括如下步骤：1)将克拉霉加入反应瓶中，并且每1mmol加入10ml稀盐酸，在室温下磁力搅拌1.5-2.5小时，加水稀释，并调节溶液pH为8.0-9.0，析出白色固体，加固体氯化钠使溶液饱和，缓慢搅拌25-35分钟，抽滤，取滤饼溶于乙酸乙酯中，用饱和氯化钠水溶液洗涤，取乙酸乙酯层，用无水硫酸钠干燥2小时，过滤，减压旋蒸乙酸乙酯，得到白色固体，为中间体；2)取步骤1)制备的中间体加入反应瓶中,再加溶剂和γ-氨基丁酸，在60℃，磁力搅拌10-14小时，冷却后减压旋蒸溶剂，再加入水使之析出淡黄色固体，过滤，滤饼用混合溶剂淋洗，鼓风烘干，得到克拉霉素衍生物；其中：所述的中间体和所述γ-氨基丁酸摩尔比1:1.2～1.8。3.根据权利要求1所述的克拉霉素衍生物的制备方法，其特征在于，所述的混合溶剂为体积比1:1的异丙醇和水。4.权利要求1所述的克拉霉素衍生物在制备克拉霉素包被原中的应用。5.一种克拉霉素包被原，其特征在于，所述的克拉霉素包被原由权利要求1所述的克拉霉素衍生物与牛血清白蛋白偶联制得的，结构式如式(Ⅱ)所示：6.权利要求1所述的克拉霉素衍生物在制备克拉霉素免疫原中的应用。7.一种克拉霉素免疫原，其特征在于，所述的克拉霉素免疫原式由权利要求1所述的克拉霉素衍生物与鲎血蓝蛋白偶联制得的，结构式所述结构如式Ⅲ所示：2CN106588857A权利要求书2/2页8.一种克拉霉素多克隆抗体，其特征在于，依次通过下述步骤制得：1)动物免疫用权利要求7所述的克拉霉素免疫原免疫新西兰大白兔；2)兔血清的收集与保存取冲击免疫后第七天的耳缘静脉采血检测血清效价及抑制，免疫八次后，心脏采全血，离心收集血清即为多克隆抗体。9.权利要求8所述的克拉霉素多克隆抗体在检测克拉霉素中的应用。10.利要求8所述的克拉霉素多克隆抗体在检测在检测大环内酯类化合物中的应用。3CN106588857A说明书1/9页克拉霉素衍生物及其制备方法与应用技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，具体涉及一种克拉霉素衍生物，以及克拉霉素衍生物作为半抗原在制备克拉霉素包被原、免疫原中的应用。背景技术[0002]克拉霉素属于大环内酯类抗生素，对大多数革兰阳性菌、部分革兰阴性菌及一些非典型致病菌(支原体、衣原体等)均有效。是红霉素的第二代衍生物之一。红霉素的第二代衍生物主要成员有罗红霉素、阿奇霉素、克拉霉素、地红霉素等。由于其第二代衍生物避免了被胃酸破坏，提高了吸收率，抗菌活性更强，因而广泛用于治疗呼吸道感染的一线药物。[0003]但近来有报道，红霉素第二代衍生物长期、持续的给药，对肝脏有毒害；对前庭系统有影响，能引起耳鸣、听觉障碍等；还能引起药热、药疹、荨麻疹等过敏反应以及部分药物可引起腹痛、腹泻、恶心等胃肠道反应；其中，克拉霉素、阿奇霉素等可能发生幻觉、失眠、意识模糊等中枢神经系统副作用，以及易透过胎盘屏障。因此，国际上有关大环内酯类抗生素的最高残留限量有着非常严格的规定，我国也出台了相应的法规来规范大环内酯类抗生素的使用。我国出台的蜂蜜产品中大环内酯类药物残留定量限为1.0μg/kg以下。为了打击非法用药，保护消费者的健康