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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107132292A(43)申请公布日2017.09.05(21)申请号201710277566.2(22)申请日2017.04.25(71)申请人延边大学地址133000吉林省延边朝鲜族自治州延吉市公园路977号(72)发明人郑明善李镐姜英子郑明昱延光海吕惠子沈光海(74)专利代理机构北京远大卓悦知识产权代理事务所(普通合伙)11369代理人周明飞(51)Int.Cl.G01N30/06(2006.01)G01N30/74(2006.01)G01N30/86(2006.01)权利要求书2页说明书11页附图4页(54)发明名称朝药肾炎草指纹图谱的建立方法及其指纹图谱(57)摘要本发明公开了朝药肾炎草指纹图谱的建立方法,包括如下步骤:取夏佛塔苷、荭草苷、牡荆素对照品,加甲醇溶解,定容,作为对照品溶液;取肾炎草药材,用乙醇溶液提取,定容,作为供试品溶液;经高效液相分离检测,以体积分数0.4%乙酸溶液为A相,体积分数100%乙腈溶液为B相,组成流动相,采用梯度洗脱,以相对保留时间和相对峰面积标定指纹特征,从而得到所述指纹图谱。本发明还公开了朝药肾炎草指纹图谱的建立方法得到的指纹图谱。CN107132292ACN107132292A权利要求书1/2页1.朝药肾炎草指纹图谱的建立方法,其特征在于,包括如下步骤:取夏佛塔苷、荭草苷、牡荆素对照品,加甲醇溶解,定容,作为对照品溶液;取肾炎草药材,用乙醇溶液提取,定容,作为供试品溶液;经高效液相分离检测,以体积分数0.4%乙酸溶液为A相,体积分数100%乙腈溶液为B相,组成流动相,采用梯度洗脱,以相对保留时间和相对峰面积标定指纹特征,从而得到所述指纹图谱。2.如权利要求1所述的朝药肾炎草指纹图谱的建立方法,其特征在于,所述高效液相分离检测条件为:采用色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相,柱温为50℃,检测波长为253nm,流速为1mL/min,分析时间为70min,采用进样量为10μL注入高效液相色谱仪。3.如权利要求1或2所述的朝药肾炎草指纹图谱的建立方法,其特征在于,所述梯度洗脱的洗脱程序如下:0分钟时,流动相A为90%的乙酸溶液,流动相B为10%的乙腈溶液;35分钟时,流动相A为75%的乙酸溶液,流动相B为25%的乙腈溶液;50分钟时,流动相A为70%的乙酸溶液,流动相B为30%的乙腈溶液;60分钟时,流动相A为60%的乙酸溶液,流动相B为40%的乙腈溶液;70分钟时,流动相A为10%的甲醇溶液,流动相B为90%的乙腈溶液;柱温为50℃;流速:1mL/min;进样量:10μL。4.如权利要求3所述的朝药肾炎草指纹图谱的建立方法,其特征在于,朝药肾炎草供试品溶液的制备工艺包括:取肾炎草药材粉末1.0g,精密称定,置20mL的容量瓶中加入70%乙醇溶液,称定初始重量,室温下超声lh,冷却至室温,用乙醇溶液补足减失重量,摇匀,用0.45μm微孔滤膜过滤,即得供试品。5.如权利要求4所述的朝药肾炎草指纹图谱的建立方法,其特征在于,对照品溶液的制备工艺包括:精密称定夏佛塔苷、荭草苷、牡荆素对照品,分别称取5mg,5mg,2mg依次置于10mL、25mL、10mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,定容,制成浓度分别为500ppm,200ppm,200ppm的溶液,经0.45μm微孔滤膜滤过,即得对照品溶液备用。6.如权利要求5所述的朝药肾炎草指纹图谱的建立方法,其特征在于,所述指纹图谱共有21个共有指纹峰,相对保留时间分别为:1号峰:0.281;2号峰:0.368;3号峰:0.444;4号峰:0.603;5号峰:0.824;6号峰为参照峰:1.000;7号峰:1.053;8号峰:1.079;9号峰:1.150;10号峰:1.185;11号峰:1.206;12号峰:1.225;13号峰:1.271;14号峰:1.332;15号峰:1.362;16号峰:1.380;17号峰:1.413;18号峰:1.498;19号峰:1.559;20号峰:1.741;21号峰:1.768。7.如权利要求1、2、4-6中任一项所述的朝药肾炎草指纹图谱的建立方法,其特征在于,所述指纹图谱共有21个共有指纹峰,相对峰面积分别为:1号峰:0.662;2号峰:0.744;3号峰:0.303;4号峰:0.092;5号峰:0.242;6号峰为参照峰:1.000;7号峰:0.152;8号峰:0.061;9号峰:0.398;10号峰:1.015;11号峰:0.136;12号峰:0.370;13号峰:1.671;14号峰:0.547;15号峰:0.189;16号峰:0.318;17号峰:0.133;18号峰:0.177;19号峰:0.107;20号峰:0.159