广西铁皮石斛HPLC指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN101979052A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN101979052A(43)申请公布日2011.02.23(21)申请号201010298226.6A61P37/04(2006.01)(22)申请日2010.09.30A61P39/06(2006.01)A61P3/10(2006.01)(71)申请人广西壮族自治区农业科学院蔬菜研A61P35/00(2006.01)究所地址530007广西壮族自治区南宁市大学东路174号(72)发明人何铁光王爱勤卢声仙李杨瑞王灿琴唐胜董文斌韦柱杨黄岛平龚明霞赵坤(74)专利代理机构广西南宁公平专利事务所有限责任公司45104代理人黄永校(51)Int.Cl.A61K36/8984(2006.01)G01N30/02(2006.01)G01N30/36(2006.01)权利要求书1页说明书3页附图1页(54)发明名称广西铁皮石斛HPLC指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱(57)摘要本发明公开了一种广西铁皮石斛HPLC指纹图谱的建立方法，该建立方法通过取铁皮石斛粉末，适量10％氨水润湿，85℃下在甲醇水浴回流提取4h后，过滤、蒸干，再用甲醇定容，溶液过微孔滤膜，取滤液进行色谱测定，HPLC色谱分析条件：色谱柱为AlltimaC18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为乙腈-0.1％磷酸水溶液，梯度洗脱，流速1.2mL/min；检测波长310nm；柱温30℃，得到铁皮石斛的HPLC指纹图谱。本发明还公开了上述方法所得的标准指纹图谱，该指纹图谱有13个共有色谱峰。本发明方法精确，稳定、重现性好，所得指纹图谱可为人工合理采收铁皮石斛及为其质量控制提供科学参考。CN109752ACCNN110197905201979057A权利要求书1/1页1.一种广西铁皮石斛HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于该建立方法包括如下步骤：(1)供试品溶液的制备：精密称取过60目筛的铁皮石斛粉末1.0g于磨口三角瓶中，适量10％氨水润湿，加入甲醇50mL并密闭静置30min，于85℃下进行4h水浴回流提取，趁热过滤，滤液于65℃下旋转蒸发至干后，用5mL甲醇溶解并定容，后用0.45μm微孔滤膜过滤，取滤液进行色谱测定；(2)HPLC色谱分析条件：色谱柱为4.6mm×250mm5μm的AlltimaC18，以乙腈-0.1％磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，检测波长为310nm，流速为1.2mL/min，柱温为30℃；(3)测定：精确吸取供试品溶液20μL注入液相色谱仪，按步骤(2)的条件操作，记录60min的色谱图。2.根据权利要求1所述的广西铁皮石斛HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述梯度洗脱的程序设为时间梯度0、10、20、25、40、55、60min，乙腈对应的浓度梯度15％、22％、25％、27.5％、30％、30％、15％。3.根据权利要求1所述的广西铁皮石斛HPLC指纹图谱的建立方法所得的标准指纹图谱，其特征在于：该指纹图谱共有色谱峰有13个，其保留时间分别为6.387min、7.595min、8.091min、9.104min、10.494min、11.743min、13.133min、14.418min、16.777min、25.759min、28.555min、31.284min、32.533min。2CCNN110197905201979057A说明书1/3页广西铁皮石斛HPLC指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱技术领域[0001]本发明涉及中药鉴定方法，尤其是涉及广西铁皮石斛HPLC指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱。背景技术[0002]铁皮石斛(DendrobiumcandidumWall.exLindl.)是兰科石斛属多年生附生草本植物，是一种名贵的中药材，广西是石斛主要的分布区域之一。具有增强免疫力、抗氧化、降血糖和抑制癌症等药理功效。由于人为长期无节制采挖及不合理利用石斛，其野生资源日趋减少，行业内出现了一些以假乱真、以次充好的混乱局面。目前，一些研究者进行人工栽培铁皮石斛，或者尝试用组织培养物替代原药材。因此，有必要对利用色谱指纹图谱对栽培的铁皮石斛、组织培养物和原药材的药材质量进行评价。[0003]色谱指纹图谱是一种综合的、可量化的鉴别手段，可以判断药材的真伪、评价优劣，可以在整体和局部区分不同品种的药材、同一品种野生和种植或者组织培养材料、同一品种不同产地的药材、同一品种同一产地不同年份的药材。迄今为止，有关铁皮石斛HPLC指纹图谱的专利有1项，已发表的论文有1篇，其中，成金乐等对石斛(包含铁皮石斛)中酚类和黄酮类成分进行了HPLC指纹图谱分析，(成金乐，李先霞，徐吉银，等.石斛色谱指纹图谱测定方法，CN20081021