百乐眠胶囊指纹图谱的建立方法及其指纹图谱.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107727753A(43)申请公布日2018.02.23(21)申请号201710773933.8(22)申请日2017.08.31(71)申请人扬子江药业集团有限公司地址225321江苏省泰州市扬子江南路1号(72)发明人赵静陈炜伟谭琴姚仲青宋敏朱建华李鹏(74)专利代理机构南京思拓知识产权代理事务所(普通合伙)32288代理人吕鹏涛(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)权利要求书3页说明书17页附图8页(54)发明名称百乐眠胶囊指纹图谱的建立方法及其指纹图谱(57)摘要本发明涉及药物分析领域，具体涉及一种百乐眠胶囊指纹图谱的建立方法及其指纹图谱。本发明以百乐眠胶囊内容物溶液为供试品溶液，以溶解有槲皮苷、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-D葡萄糖苷、五味子醇甲、丹酚酸B和大黄素的溶液为对照品溶液，通过HPLC色谱仪测定分别得到供试品溶液和对照品溶液的液相色谱；将得到的液相色谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统分析，经多点校正、数据匹配，分析得到百乐眠胶囊指纹图谱。标定了24个共有峰，指认了5个共有特征峰，选择9号峰槲皮苷作为指纹图谱中的参照峰，确定了各共有峰的相对保留时间。本发明指纹图谱能较全面的反映百乐眠胶囊的质量信息，保证产品质量均一稳定。CN107727753ACN107727753A权利要求书1/3页1.一种百乐眠胶囊指纹图谱的建立方法，其特征在于以百乐眠胶囊内容物溶液为供试品溶液，以溶解有槲皮苷、2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-D葡萄糖苷、五味子醇甲、丹酚酸B和大黄素的溶液为对照品溶液，通过HPLC色谱仪测定分别得到供试品溶液和对照品溶液的液相色谱；将得到的液相色谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统分析，经多点校正、数据匹配，分析得到百乐眠胶囊指纹图谱；其中测定液相色谱时，流动相采用乙腈-磷酸-水体系，检测波长为230-280nm。2.根据权利要求1所述的百乐眠胶囊指纹图谱的建立方法，其特征在于测定液相色谱时HPLC色谱条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱温25~35℃，流速为0.8-1.2mL/min，检测波长为230-280nm，以乙腈为流动相A，以体积分数为0.06-0.2%磷酸水溶液为流动相B，在体积比为5~80:95~20的范围内梯度洗脱。3.根据权利要求1所述的百乐眠胶囊指纹图谱的建立方法，其特征在于每1mL对照品溶液中含有20～195µg槲皮苷、40～135µg2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-D葡萄糖苷、16～144µg五味子醇甲、24～216µg丹酚酸B和4～12µg大黄素；供试品溶液或对照品溶液的溶剂选自甲醇、水或者甲醇水混合溶液。4.根据权利要求1所述的百乐眠胶囊指纹图谱的建立方法，其特征在于其包括以下步骤：（1）供试品溶液的制备：将百乐眠胶囊内容物加溶剂，称重，回流或超声溶解，冷却至室温，补重，滤过，取续滤液；（2）对照品溶液的制备：精密称取槲皮苷对照品、2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-D葡萄糖苷对照品、五味子醇甲对照品、丹酚酸B对照品、大黄素对照品，加溶剂制成每1mL含有20～195µg槲皮苷、40～135µg2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-D葡萄糖苷、16～144µg五味子醇甲、24～216µg丹酚酸B和4～12µg大黄素的对照品溶液；（3）HPLC色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱温25~35℃，流速为0.8-1.2mL/min，检测波长为230-280nm，以乙腈为流动相A，以体积分数为0.06-0.2%磷酸水溶液为流动相B，在体积比为5~80:95~20的范围内梯度洗脱；（4）分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液5~20µL，注入高效液相色谱仪，测定，分别得到供试品溶液和对照品溶液的液相色谱；（5）利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统，经液相色谱数据导入、多点校正和数据匹配，分析得到百乐眠胶囊指纹图谱。5.根据权利要求4所述的百乐眠胶囊指纹图谱的建立方法，其特征在于其包括以下步骤：（1）供试品溶液的制备：取百乐眠胶囊内容物，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为70%-100%甲醇水溶液，称定重量，加热回流30-90min或超声20-40min进行溶解，放冷，用体积分数为70%-100%甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，过0.45µm的微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液；（2）对照品溶液的制备：精密称取槲皮苷对照品、2,3,5,4′—四羟基二苯乙烯-2-O-D葡萄糖苷对照品、五味子醇甲对照品、丹酚酸B对照品、大黄素对照品，加体积分数为70%-100%甲醇水溶液分别制成每1mL含65µg槲皮苷、45µg2,3,5,