青皮药材指纹图谱检测方法及其指纹图谱.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108267535A(43)申请公布日2018.07.10(21)申请号201611269902.0(22)申请日2016.12.31(71)申请人九芝堂股份有限公司地址410205湖南省长沙市高新区桐梓坡西路339号(72)发明人邓芸谷陟欣叶惠煊谭真鲁鲁袁莉黄胜朱丽(51)Int.Cl.G01N30/89(2006.01)G01N30/34(2006.01)G01N30/06(2006.01)G01N30/14(2006.01)权利要求书2页说明书8页附图7页(54)发明名称青皮药材指纹图谱检测方法及其指纹图谱(57)摘要本发明公开了一种青皮药材指纹图谱的建立方法及其指纹图谱，涉及中药材的指纹图谱技术领域。方法包括：(a)对照品溶液的制备；(b)供试品溶液的制备；(c)HPLC检测条件；(d)以橙皮苷为参照峰的标准指纹图谱的制定；(e)指纹图谱的质量控制。该方法对各供试品的前处理方法简单，特征性成分保留完整，重复性、稳定性良好，精密度高，具一定的专属性；所得指纹图谱中各特征峰分离效果较好；可用于鉴别青皮药材的真伪及优劣。CN108267535ACN108267535A权利要求书1/2页1.青皮药材的指纹图谱检测方法，包括如下步骤：(1)对照品溶液的制备：称取橙皮苷对照品，置于容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成对照品溶液；(2)供试品溶液的制备：称取青皮药材粉末(过四号筛)，置锥形瓶中，加甲醇，称重，超声提取20～45min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得青皮药材供试品溶液；(3)HPLC检测：色谱条件为：色谱柱为C18反相色谱柱(4.6×250mm,5μm)；柱温为30～40℃；检测波长为360nm；流动相A为乙腈，流动相B为0.1～0.5％磷酸溶液，总流速为0.8～1.2ml/min；分析时间90分钟；采用梯度洗脱，梯度洗脱程序见表1：表1梯度洗脱程序表(4)以橙皮苷为参照峰的标准指纹图谱的制定吸取步骤(1)(2)所得的橙皮苷对照品溶液20μl、青皮药材供试品溶液10μl，分别注入高效液相色谱仪中，照高效液相色谱法测定，记录色谱图；依据所得的13批青皮药材的指纹图谱，制定标准指纹图谱；所述标准指纹图谱具有17个特征峰，其中9号峰为橙皮苷；(5)指纹图谱的质量控制将青皮药材指纹图谱与步骤(4)制定的标准指纹图谱进行比较，计算相似度，识别所具有的共同吸收峰的数量，确定相似度。2.根据权利要求1所述的青皮药材指纹图谱检测方法，其特征在于：所述步骤(2)供试品溶液的制备按照下述方法进行：称取青皮药材粉末(过四号筛)0.2～1.5g，置锥形瓶中，精密加甲醇20～50ml，称重，超声提取20～45min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得青皮药材供试品溶液。3.根据权利要求1所述的青皮药材指纹图谱检测方法，其特征在于：所述步骤(3)中流动相B为0.1％磷酸溶液。4.根据权利要求1所述的青皮药材指纹图谱检测方法，其特征在于：所述步骤(3)中总流速为1ml/min。2CN108267535A权利要求书2/2页5.根据权利要求1所述的青皮药材指纹图谱检测方法，其特征在于所建立的青皮药材指纹图谱由17个共有指纹峰构成，所述指纹图谱的17个共有指纹峰的相对保留时间范围及及相对标准偏差如下表2：表2指纹图谱17个共有指纹峰的相对保留时间及相对标准偏差3CN108267535A说明书1/8页青皮药材指纹图谱检测方法及其指纹图谱技术领域[0001]本发明涉及中药材的指纹图谱技术领域，尤其是青皮药材的指纹图谱的建立方法及其指纹图谱。背景技术[0002]中药材指纹图谱是指中药材经过适当处理后，采用一定的分析手段和检测仪器得到的，能够标示该中药材特性的图谱，它是现阶段可以较全面地反映中药材内在质量的最有效的手段之一，也得到了国际社会的认可。[0003]青皮为常用中药，主要为芸香科植物橘(CitrusreticulataBlanco)及其栽培变种的干燥幼果或未成熟果实的青色果皮。青皮主要分为四花青皮和个青皮。每年5～6月收集自落的幼果，晒干，习称“个青皮”；7～8月采收未成熟的果实，在果皮上纵剖成四瓣至基部，除尽果瓤，晒干，习称“四花青皮”；对切成两半者，称“对开青皮”。青皮味苦、辛，性温，具有疏肝破气、消积化滞、散结的功效，主治胸胁脘腹胀痛、食积不消、疝气、乳痈等。青皮与枳实、枳壳等均来源于芸香科橘属的植物果实或果皮(枳实为芸香科植物酸橙CitrusaurantiumL.及其栽培变种或甜橙CitrussinensisOsbeck的干燥幼果，枳壳芸香科植物酸橙CitrusaurantiumL.及其