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干细胞外泌体的分离方法.pdf
2023-11-19
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秀美****甜v
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干细胞外泌体的分离方法.pdf
本发明涉及一种干细胞外泌体的分离方法，包括如下步骤：采用含血清培养基培养干细胞至细胞密度大于70％，收集干细胞，然后采用不含血清培养基继续培养；收集得到的产物中的培养基，然后过滤，收集滤液；将滤液加入第一浓缩管，离心，得到浓缩液；将浓缩液分装于第二浓缩管，离心；在第二浓缩管中加入缓冲液，再次离心；将再次离心后的第二浓缩管的内管倒置于收集管中，离心，收集管中的液体为含高浓度干细胞外泌体的溶液。本发明提供的干细胞外泌体的分离方法，通过联合运用大小不同的浓缩管，可以实现快速、高效、廉价地提取培养基中的外泌体；并
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本发明提供一种外泌体的分离方法，所述分离方法至少包括以下步骤：（1）向目标细胞中导入带有标签的CD63，培养；（2）离心后取上清液；（3）向上清液中加入磁性体，所述磁性体上含有能够与CD63上的标签特异性结合的标记物，孵育；（4）将上清液置于磁场中；（5）去除上清液后加入缓冲液，加入分选柱，利用缓冲液洗脱分选柱上滞留的外泌体，并收集。采用本发明所述的收集方法，收集效率高。
2023-11-19
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本发明涉及一种外泌体分离纯化方法,取含有外泌体的体液或培养液,经过阴离子交换层析、阳离子交换层析和分子筛层析后获得纯化后的外泌体溶液。通过这样的提纯方法即便在大规模的外泌体需求中,也能够低成本、高效率的获得高纯度的外泌体;与现有的外泌体纯化方法如离心法、PEG多聚物沉淀法、亲和层析法、超滤法、分子筛尺寸排阻色谱法相比,本发明可以实现不同体积(100ml至500L)外泌体纯化,尤其杂质蛋白较多的乳源制品,也可获得纯度99%以上的乳源外泌体,同时具有低成本及高回收率的优势,能满足工业化生产的需求。
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本实用新型提供了一种外泌体分离系统,包括1)第一死端过滤装置,用于从包括所述外泌体的细胞培养上清液中除去粒径大于所述外泌体的粒径的细胞组分;2)与所述第一死端过滤装置连接的第一容器,其容纳经所述死端过滤装置过滤后的滤出液;以及3)切向流过滤装置,用于对所述第一容器中的所述滤出液进行循环浓缩,同时除去粒径小于所述外泌体的粒径的细胞组分。本实用新型外泌体分离系统可用于外泌体大规模分离,解决了现有技术中外泌体分离操作复杂、样本量小、重复性差的问题。
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