一种外泌体的分离方法及其分离装置.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112553136A(43)申请公布日2021.03.26(21)申请号201910909535.3(22)申请日2019.09.25(71)申请人深圳光彩生命工程技术有限公司地址518000广东省深圳市宝安区新安街道67区大仟工业厂区2号厂房11楼(72)发明人丁小梅(74)专利代理机构北京中仟知识产权代理事务所(普通合伙)11825代理人田江飞(51)Int.Cl.C12N5/00(2006.01)C12M1/00(2006.01)权利要求书2页说明书4页附图2页(54)发明名称一种外泌体的分离方法及其分离装置(57)摘要本发明公开了一种外泌体的分离方法及其分离装置，在现有的超速离心分离方法的基础上进行改进，向每次离心后产物添加等体积的缓冲液1xPBS缓冲液，最后去除上清液，保留沉淀，通过在现有的外泌体的分离装置基础上进行改进，增设了自动开盖组件，节约了每次离心开盖时间，此外，通过排气装置的设计，在弹性件的作用下，保压管的顶端和泄压盖紧密贴合，使得壳体内气压保持在恒定的范围内，通过在第一凸沿和第二凸沿之间设置有密封机构，大大提升了装置的密封性能，另外，在转盘机构上进行优化，由于每个样品放置槽上的安装槽不少于三个，且等距离分布在盘体的半径上，使得装置能够至少满足三组不同样品的分组对比实验。CN112553136ACN112553136A权利要求书1/2页1.一种外泌体的分离方法，其特征在于：具体包括如下步骤：S1：将样本细胞培养液、血清或血浆中的一种进行离心操作，离心参数为：350xg，环境温度5-8℃，离心时间12-14min，然后吸取上清液，收集样品，并向样品中添加等体积的缓冲液，得到产物A；S2：将步骤S1得到的产物A进行离心操作，离心参数为：2000-2100xg，5-8℃，离心时间12-13min，然后吸取上清液，收集样品，并向样品中添加等体积的缓冲液，得到产物B；S3：将步骤S2得到的产物B进行离心操作，离心参数为：10000-10500xg，环境温度5-8℃，离心时间30-32min，然后吸取上清液，收集样品，并向样品中添加等体积的缓冲液，得到产物C；S4：将步骤S3得到的产物C进行离心操作，离心参数为：100000-105000xg，环境温度5-8℃，离心时间70-72min，去除上清液，保留沉淀，收集样品，并向样品中添加等体积的缓冲液，得到产物D；S5：将步骤S4得到的产物D进行离心操作，离心参数为：100000-105000xg，环境温度5-8℃，离心时间70-72min，去除上清液，保留沉淀，沉淀即为外泌体。2.根据权利要求1所述的一种外泌体的分离方法，其特征在于：所述步骤S1-S5中添加的等体积的缓冲液均为1xPBS缓冲液，该缓冲液由100mmol/LTris-HCl(pH8.0)，2％SDS，1％2-疏基乙醇，5mmol/LEGTA，10mmol/LEDTA混合制成。3.一种根据权利要求1-2任意一项所述的外泌体的分离装置，包括基座以及设置在基座顶部的壳体，其特征在于：所述壳体以及位于壳体顶部的盖板，所述壳体和盖板的边缘分别设置有第一凸沿和第二凸沿，所述第一凸沿的一侧通过销轴活动连接有T形件，所述T形件的一端固定连接到盖板，所述T形件的另一端活动连接到液压缸的输出端，所述液压缸的底部活动连接到基座上，所述第一凸沿和第二凸沿之间设置有密封机构，所述盖板的顶部设置有能够保持壳体内气压恒定的排气装置，所述壳体的底部安装有离心电机，所述离心电机的传动连接有能够高速旋转的转盘机构，所述第一凸沿和第二凸沿之间通过扣锁连接。4.根据权利要求3所述的一种外泌体的分离装置，其特征在于：所述密封机构包括设置在第一凸沿顶部的密封槽以及设置在第二凸沿底部的密封凸起，所述密封凸起和密封槽对应设置，所述密封凸起位于密封槽中。5.根据权利要求4所述的一种外泌体的分离装置，其特征在于：所述密封槽中还预装有第一密封圈，所述第一密封圈为厚度不小于两毫米的橡胶圈。6.根据权利要求3所述的一种外泌体的分离装置，其特征在于：所述排气装置包括中间管以及连接在中间管一端的保压管，所述保压管内部固定焊接有若干组弹性件，所述弹性件的顶端固定焊接有泄压盖，所述保压管的顶端开口设置，所述泄压盖的底端开口设置，所述保压管的顶端插入到泄压盖中。7.根据权利要求6所述的一种外泌体的分离装置，其特征在于：所述保压管和泄压盖的接触处覆盖有第二密封圈，所述第二密封圈为厚度不小于两毫米的橡胶圈。8.根据权利要求6所述的一种外泌体的分离装置，其特征在于：所述弹性件为始终处于拉伸状态的弹簧，所述弹性件不少于三组。9.根据权利要求3所述的一种外泌体的分离装置，其特征在于：所述转盘机构包括圆形2C