检测草甘膦残留的免疫层析试纸及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107478819A(43)申请公布日2017.12.15(21)申请号201710877684.7(22)申请日2017.09.25(71)申请人河南科技大学地址471000河南省洛阳市洛龙区开元大道263号(72)发明人王耀裴亚峰陈秀金任国艳樊振江李兆周高红丽李道敏曹力李燕虹曹金博金东亮(74)专利代理机构北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙)11371代理人齐云(51)Int.Cl.G01N33/53(2006.01)G01N33/543(2006.01)权利要求书1页说明书9页附图1页(54)发明名称检测草甘膦残留的免疫层析试纸及其制备方法和应用(57)摘要本发明提供了一种检测草甘膦残留的免疫层析试纸及其制备方法和应用，涉及草甘膦检测技术领域，本发明提供的检测草甘膦残留的免疫层析试纸，包括设有草甘膦特异性抗体的结合垫及设有检测印迹和对照印迹的印迹膜。本发明提供的检测草甘膦残留的免疫层析试纸是以竞争性酶联免疫原理为基础，在获得草甘膦特异性抗体的基础上，利用酶联免疫反应的高效放大作用实现草甘膦的高灵敏检测，能够检测1μg/mL以下浓度的草甘膦。本发明的免疫层析试纸操作简便、灵敏特异、结果准确直观，适用于水质、食品等多种样品中草甘膦残留的快速筛查，易于推广应用。CN107478819ACN107478819A权利要求书1/1页1.一种检测草甘膦残留的免疫层析试纸，其特征在于，所述免疫层析试纸包括吸附层，所述吸附层包括结合垫和印迹膜；所述结合垫包括草甘膦特异性抗体；所述印迹膜包括检测印迹和对照印迹。2.根据权利要求1所述的免疫层析试纸，其特征在于，所述免疫层析试纸还包括支撑板和保护膜；所述支撑板设于所述吸附层下方，用于粘结所述吸附层；所述保护膜设于所述吸附层上方，用于防止所述吸附层被外界污染。3.根据权利要求2所述的免疫层析试纸，其特征在于，所述吸附层还包括样品垫和吸水垫；所述样品垫与所述结合垫相接，用于与待测样品相接触；所述吸水垫与所述印迹膜相接，用于吸收待测样品溶液。4.根据权利要求3所述的免疫层析试纸，其特征在于，所述草甘膦特异性抗体为胶体金纳米颗粒标记的抗草甘膦兔源多克隆抗体。5.根据权利要求4所述的免疫层析试纸，其特征在于，所述检测印迹为草甘膦载体蛋白偶联物，所述对照印迹为抗小鼠IgG抗体。6.如权利要求1-5任一项所述的免疫层析试纸在检测草甘膦残留中的应用。7.如权利要求5所述的免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：将所述草甘膦特异性抗体设于所述结合垫上，将所述检测印迹和对照印迹喷点于所述印迹膜上；在所述支撑板上依次固定所述样品垫、结合垫、印迹膜和吸水垫，并覆盖所述保护膜；优选地，所述草甘膦特异性抗体为胶体金纳米颗粒标记的草甘膦兔源多克隆抗体，所述检测印迹为草甘膦载体蛋白偶联物，所述对照印迹为抗小鼠IgG抗体。8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述草甘膦载体蛋白偶联物制备方法包括：分别配置草甘膦溶液，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液和载体蛋白溶液；将所述草甘膦溶液和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液混合并反应后，加入所述载体蛋白溶液混合并反应，得到反应产物；将所述反应产物透析后，离心取上清液，得到所述草甘膦载体蛋白偶联物。9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述草甘膦兔源多克隆抗体的制备方法包括：制备所述偶联物，应用所述偶联物作为免疫原对实验兔进行免疫，所述免疫完成后采血并提纯抗体，得到所述草甘膦兔源多克隆抗体。10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述胶体金纳米颗粒标记的草甘膦兔源多克隆抗体的制备方法包括：制备胶体金溶液，将所述草甘膦兔源多克隆抗体加入所述胶体金溶液中混合并反应，离心后得到沉淀，将所述沉淀复溶，再次离心得到胶体金纳米颗粒沉淀，将所述胶体金纳米颗粒沉淀用四硼酸钠溶液复溶，得到所述胶体金纳米颗粒标记的草甘膦兔源多克隆抗体。2CN107478819A说明书1/9页检测草甘膦残留的免疫层析试纸及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及草甘膦检测技术领域，尤其是涉及一种检测草甘膦残留的免疫层析试纸及其制备方法和应用。背景技术[0002]草甘膦(Glyphosate)是美国孟山都公司在1971年开发的一种广谱灭生性水溶性除草剂，能够非选择性的有效抑制多种一年生或多年生杂草。草甘膦化学名为N-膦羧甲基甘氨酸(N-Phosphonomethyl-glycine，PMG)，商品名为镇草宁、农达等，化学式为C3H8NO5P，分子量为169。[0003]随着现代农业的迅速发展，农药的使用越来越广泛，农药残留对环境、动植物及人体健康造成的威胁越来越凸