检测三聚氰胺残留的荧光微球免疫层析试纸条及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106771238A(43)申请公布日2017.05.31(21)申请号201611150287.1(22)申请日2016.12.14(71)申请人北京勤邦生物技术有限公司地址102206北京市昌平区回龙观国际信息产业基地高新四街8号(72)发明人冯才伟何方洋万宇平冯静杨昌松崔廷婷崔彦虎魏力杰(51)Int.Cl.G01N33/68(2006.01)G01N33/533(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图1页(54)发明名称检测三聚氰胺残留的荧光微球免疫层析试纸条及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种检测三聚氰胺残留的荧光微球免疫层析试纸条及其制备方法和应用。试纸条包括底板及在底板上依次搭接粘贴的样品结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，样品结合垫上包埋有荧光微球标记的抗三聚氰胺单克隆抗体，硝酸纤维素膜上固定有检测区和质控区，检测区喷涂有三聚氰胺半抗原-载体蛋白偶联物，质控区喷涂有羊抗鼠抗抗体。本发明主要用于三聚氰胺残留的检测，具有灵敏度高、检测快速、操作方便、经济实用等优点。CN106771238ACN106771238A权利要求书1/1页1.一种检测三聚氰胺残留的荧光微球免疫层析试纸条，其特征在于包括底板及在底板上依次搭接粘贴的样品结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述样品结合垫上包埋有荧光微球标记的抗三聚氰胺单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上固定有检测区和质控区，检测区喷涂有三聚氰胺半抗原-载体蛋白偶联物，质控区喷涂有羊抗鼠抗抗体；其中，所述三聚氰胺半抗原-载体蛋白偶联物是由三聚氰胺半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清白蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白或人血清白蛋白，所述三聚氰胺半抗原是由三聚氰胺与琥珀酰亚胺基丙醛反应得到，分子结构式为：2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于所述荧光微球是直径为100～300nm的用聚苯乙烯包裹荧光物质的微球，其表面连接有—COOH基团，所述荧光物质为异硫氰酸荧光素。3.一种权利要求1-2任一项所述的检测三聚氰胺残留的荧光微球免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于包括步骤：1)样品结合垫的制备：用市售的荧光微球标记抗三聚氰胺单克隆抗体，并将其以特定缓冲体系稀释后，将样品结合垫浸泡于稀释缓冲液中，经真空冷冻干燥后制备；2)硝酸纤维素膜的制备：将三聚氰胺半抗原-载体蛋白偶联物喷涂到硝酸纤维素膜上的检测区范围，制成检测区；将羊抗鼠抗抗体喷涂到硝酸纤维素膜上的质控区范围，制成质控区；3)组装和剪切：在底板上依次搭接地粘贴包埋有荧光微球标记抗三聚氰胺单克隆抗体的样品结合垫、固定有检测区和质控区的硝酸纤维素膜及吸水垫，并剪切成所需的宽度即为荧光微球免疫层析试纸条。4.一种权利要求1-2任一项所述的检测三聚氰胺残留的荧光微球免疫层析试纸条在检测三聚氰胺中的应用，其特征在于包括步骤：1)样品前处理；2)用权利要求1-2任一项所述的荧光微球免疫层析试纸条进行检测；3)用荧光检测仪分析检测结果。2CN106771238A说明书1/7页检测三聚氰胺残留的荧光微球免疫层析试纸条及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于食品安全中非法添加物检测领域，具体涉及一种检测样品中三聚氰胺残留的荧光微球免疫层析试纸条及其制备方法和应用。技术背景[0002]三聚氰胺简称三胺，化学名1,3,5-三嗪-2,4,6-三氨，分子式为C3N6H6，相对分子质量为126.12，是一种低毒无味的纯白色单斜棱晶体，广泛应用于涂料、建材、造纸、皮革、纺织等行业中。由于三聚氰胺的含氮量高达66％，是蛋白质平均含氮量的4倍，而常用的凯氏定氮法测定样品中的蛋白质含量时却不能区分这种非蛋白氮，因此被不法商贩利用添加在饲料和食品中以提高食品和饲料中粗蛋白质检测数值。动物实验表明，三聚氰胺对于哺乳动物属于微毒、低毒类化学物质，长期饲喂可能造成生殖、泌尿系统的损害，膀胱、肾部出现结石，并可进一步诱发膀胱癌。联合国负责食品安全标准的机构国际食品法典委员会2010年7月6日表示，该委员会已就食品中三聚氰胺的允许含量设立了新标准。新标准规定，每千克婴儿配方奶粉中的三聚氰胺含量不能超过1mg，而每千克其他食品或动物饲料中的三聚氰胺含量不能超过2.5mg。因此，加强对三聚氰胺检测技术的研究和快速检测技术的发展是非常有必要的。[0003]目前，检测三聚氰胺比较经典的方法有高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱/质谱法(LC-MS/MS)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)等，这些都是比较传统的方法，也是目前的确证方法。另外，目前常用的还有酶联免疫法(ELISA)。但由于以上方法均需先进检测仪器，检测费用昂贵、步骤繁琐耗时，且对操作人员专业性要求较高，不适用于基层