快速检测苯并[a]芘污染的免疫层析试纸条、制备方法及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115902209A(43)申请公布日2023.04.04(21)申请号202211073972.4G01N33/543(2006.01)(22)申请日2022.09.02(83)生物保藏信息CCTCCNO:C2018822018.04.03(71)申请人中国农业科学院油料作物研究所地址430062湖北省武汉市武昌区徐东二路2号(72)发明人唐晓倩张奇黄小容白艺珍印南日(74)专利代理机构湖北武汉永嘉专利代理有限公司42102专利代理师胡建平(51)Int.Cl.G01N33/558(2006.01)权利要求书2页说明书10页G01N33/532(2006.01)序列表（电子公布）附图1页(54)发明名称快速检测苯并[a]芘污染的免疫层析试纸条、制备方法及其应用(57)摘要本发明公开了一种快速检测苯并[a]芘的免疫层析试纸条及其制备方法和应用。此试纸条包括吸水垫、检测垫、金标垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接并从上至下依次粘贴在底板上，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上横向设置质控线和检测线，质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体，所述检测线位于质控线的下方，所述检测线上包被有苯并[a]芘‑卵清白蛋白偶联物；所述金标垫横向喷涂有纳米金标记的抗苯并[a]芘单克隆抗体；所述的抗苯并[a]芘单克隆抗体由保藏编号为CCTCCNO:C201882的BBBE1H1分泌产生。其可实现对苯并[a]芘的快速、高灵敏检测。CN115902209ACN115902209A权利要求书1/2页1.快速检测苯并[a]芘的免疫层析试纸条，其特征在于：包括吸水垫、检测垫、金标垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接并从上至下依次粘贴在底板上，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上横向设置质控线和检测线，所述质控线上包被有兔抗鼠多克隆抗体，所述检测线位于质控线的下方，所述检测线上包被有苯并[a]芘‑卵清白蛋白偶联物；所述金标垫横向喷涂有纳米金标记的抗苯并[a]芘单克隆抗体；所述的抗苯并[a]芘单克隆抗体由保藏编号为CCTCCNO:C201882的BBBE1H1杂交瘤细胞株分泌产生。2.根据权利要求1所述的快速检测苯并[a]芘的免疫层析试纸条，其特征在于：检测线上每厘米所需要的苯并[a]芘‑卵清白蛋白偶联物(BAP‑OVA)的包被量为100～300ng；质控线上每厘米所需兔抗鼠多克隆抗体的包被量为50～200ng。3.根据权利要求1所述的快速检测苯并[a]芘的免疫层析试纸条，其特征在于：金标垫上每厘米喷涂长度所需的纳米金标记的抗苯并[a]芘单克隆抗体的用量为100～200ng。4.根据权利要求1所述的快速检测苯并[a]芘的免疫层析试纸条，其特征在于：检测线与检测垫上沿的间距为15～20mm，所述检测线与质控线的间距为5～7mm。5.权利要求1所述的快速检测苯并[a]芘的免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)吸水垫的制备将吸水纸剪裁即得吸水垫；(2)检测垫的制备检测线的包被：将苯并[a]芘‑卵清白蛋白偶联物(BAP‑OVA)用包被缓冲液分别配制成0.25～0.5mg/mL的包被液，将其于硝酸纤维素膜上进行分别包被，得到检测线，然后于37～40℃条件下干燥30～60分钟；所述包被苯并[a]芘‑卵清白蛋白偶联物(BAP‑OVA)的检测线上每厘米所需要的苯并[a]芘‑卵清白蛋白偶联物(BAP‑OVA)的包被量为100～300ng；检测线与硝酸纤维素膜上沿的间距为15～20mm；质控线的包被：将兔抗鼠多抗用包被缓冲液配制成0.2～0.4mg/mL的包被液，将其横向包被于硝酸纤维素膜上，得到质控线，每厘米质控线上所需兔抗鼠多克隆抗体的包被量为50～200ng，然后于37～40℃条件下干燥1～2小时；(3)样品垫的制备将玻璃纤维膜放入封闭液中浸湿，取出，于37～40℃条件下干燥6～10小时，得样品垫，然后置干燥器中室温保存；(4)金标垫的制备将玻璃纤维膜放入封闭液中浸湿，取出，于37～40℃条件下干燥6～10小时，用点喷方式向已干燥的玻璃纤维膜上横向喷涂纳米金标记的抗苯并[a]芘单克隆抗体溶液，其中：每厘米喷涂长度所需的纳米金标记的抗苯并[a]芘单克隆抗体的用量为100～200ng，然后真空冷冻干燥2～4小时，置干燥器中室温保存；(5)试纸条的组装吸水垫、检测垫、金标垫和样品垫由上到下粘贴在底板上，相互之间重叠1～2mm，即得检测苯并[a]芘的免疫层析试纸条。2CN115902209A权利要求书2/2页6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：使用的封闭液每100mL中含有：蔗糖2～5g，氯化钠0.8g，氯化钾0.02g，叠氮化钠0.02～0.05g，磷酸二氢钾0.02g，牛血清白