一种利福昔明半抗原、人工抗原及其制备方法与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108794507A(43)申请公布日2018.11.13(21)申请号201710283528.8(22)申请日2017.04.26(71)申请人北京维德维康生物技术有限公司地址100095北京市海淀区北清路156号环保示范园9号院3号楼(72)发明人秦誉聂靖东邢维维刘薇吴雨洋(51)Int.Cl.C07D498/22(2006.01)C07K14/765(2006.01)C07K14/77(2006.01)C07K14/795(2006.01)C07K14/47(2006.01)C07K16/44(2006.01)G01N33/535(2006.01)G01N33/558(2006.01)权利要求书2页说明书10页附图3页(54)发明名称一种利福昔明半抗原、人工抗原及其制备方法与应用(57)摘要本发明公开了一种利福昔明半抗原、人工抗原及其制备方法与应用。本发明所提供的利福昔明人工抗原为将式I所示的利福昔明半抗原与载体蛋白偶联所得的抗原。本发明所提供利福昔明人工抗原合成方法简单，纯度高和产率高，对于利福昔明抗体的制备，以及利福昔明药物残留检测具有重大价值。式I。CN108794507ACN108794507A权利要求书1/2页1.一种化合物，其结构如式I所示：式I。2.制备权利要求1所述化合物的方法，包括步骤为：步骤一：利福昔明原料药加入甲醇搅拌，而后加入2M氢氧化钠水溶液，所述利福昔明原料药、所述甲醇和所述氢氧化钠水溶液的配比为1500-1600mg：25ml：2ml，所需反应温度为65-70℃，获得反应液；步骤二：20-24℃条件下用1M盐酸调pH值在5.0-6.0后将步骤一获得的反应液滴加到冰水中，析出黄色固体，过滤，水洗，鼓风干燥，获得利福昔明水解中间体；所述盐酸、所述冰水、所述水的配比为4-4.5ml：45-50ml：10-12ml；步骤三：将利福昔明水解中间体与吡啶、琥珀酸酐按照配比为1250-1339mg：15ml：200-220mg的比例进行反应，减压浓缩，获得残余物；向残余物中加入水，析出黄色固体，过滤，水洗，鼓风干燥，获得所述化合物利福昔明琥珀酸酯半抗原，所述利福昔明水解中间体、所述吡啶、所述琥珀酸酐和所述水的配比为1250-1350mg：15ml：200-220mg：20ml。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤一的反应时间为1-2h，所述步骤二和步骤三的鼓风干燥为其中所述鼓风干燥为的温度具体为50℃，时间具体为5-6小h。4.利福昔明抗原，为将权利要求1所述化合物与载体蛋白偶联所得的抗原。5.根据权利要求4所述的利福昔明抗原，其特征在于：所述载体蛋白可以是牛血清白蛋白、卵清蛋白、人血清白蛋白、血蓝蛋白、鼠血清蛋白、甲状腺蛋白或兔血清蛋白。6.权利要求4或5所述的利福昔明抗原的制备方法，包括如下步骤：将权利要求1所述化合物与载体蛋白通过酰胺键偶联，获得所述利福昔明抗原；权利要求1所述化合物与所述载体蛋白偶联的摩尔比为13.88：1。7.根据权利要求6所述的利福昔明抗原的制备方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：（1）将所述利福昔明半抗原（式I）溶解于二甲基甲酰胺（DMF）中，然后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），20-25℃磁力搅拌反应2-3h，得到溶液I；其中，所述利福昔明半抗原（式I）、所述二甲基甲酰胺（DMF）、所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）、所述N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）的配比为37.63mg：1.5ml：21.5mg：13mg；（2）将所述载体蛋白置于0.1M碳酸氢钠缓冲液中，200rpm搅拌10min，充分溶解，得到溶液II；所述载体蛋白与所述0.1M碳酸氢钠缓冲液的配比为33.6-50mg：3.5ml；（3）将所述溶液I和所述溶液II混合，具体为在0-4℃条件下，1000rpm搅拌下，将溶液I2CN108794507A权利要求书2/2页逐滴加入到所述溶液II中，500rpm搅拌反应24h，得到溶液III；（4）用磷酸盐缓冲液（0.01MPBS，pH7.2），于4℃对所述溶液III搅拌透析3天，得到所述利福昔明抗原。8.权利要求1所述化合物或权利要求4所述利福昔明抗原的应用，其特征在于定性或定量检测利福昔明；制备利福昔明抗体。9.利用权利要求4所述利福昔明抗原制备的抗体。10.根据权利要求8所述的利福昔明抗原的应用，其特征在于可以为制备酶联免疫试剂盒和胶体金检测卡，所述检测样本可以为动物肉和组织及液态奶。3CN108794507A说明书1/10页一种利福昔明半抗原、人工抗原及其制备方法与应用技术领域[000