一种利福昔明半抗原、人工抗原及其制备方法与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111560027A(43)申请公布日2020.08.21(21)申请号202010671590.6(22)申请日2020.07.14(71)申请人北京维德维康生物技术有限公司地址100095北京市海淀区地锦路9号院3号楼(72)发明人马立才聂靖东丁亚芳邢维维刘薇李蓉蓉(51)Int.Cl.C07D498/22(2006.01)C07K14/435(2006.01)C07K14/765(2006.01)C07K14/77(2006.01)C07K14/795(2006.01)C07K16/44(2006.01)G01N33/53(2006.01)权利要求书2页说明书10页G01N33/577(2006.01)序列表2页附图2页(54)发明名称一种利福昔明半抗原、人工抗原及其制备方法与应用(57)摘要本发明公开了一种利福昔明半抗原、人工抗原及其制备方法与应用。本发明所提供的利福昔明人工抗原为将式I所示的利福昔明半抗原与载体蛋白偶联所得的抗原。本发明所提供利福昔明人工抗原合成方法简单，纯度高和产率高，对于利福昔明抗体的制备，以及利福昔明药物残留检测具有重大价值。式I。CN111560027ACN111560027A权利要求书1/2页1.一种化合物，其结构如式I所示：式I。2.制备权利要求1所述化合物的方法，包括步骤为：利福霉素S溶解于二甲基甲酰胺中，加入N-溴代琥珀酰亚胺反应，反应液经沉淀、过滤、干燥获得670mg中间体1，所述利福霉素S、二甲基甲酰胺、N-溴代琥珀酰亚胺的配比为1000mg：6ml：300mg；中间体1溶解于甲醇中，加入三乙胺、2-氨基异烟酸反应，反应液经旋干、层析纯化、旋干获得386mg产物，所述中间体1、甲醇、三乙胺、2-氨基异烟酸的配比为500mg：5ml：2ml：100mg，所述层析展开剂为二氯甲烷和甲醇，二氯甲烷、甲醇的配比为15：1。3.利福昔明抗原，为将权利要求1所述化合物与载体蛋白偶联所得的抗原。4.根据权利要求3所述的利福昔明抗原，其特征在于：所述载体蛋白可以是牛血清白蛋白、卵清蛋白、人血清白蛋白、血蓝蛋白、鼠血清蛋白、甲状腺蛋白或兔血清蛋白。5.根据权利要求3或4所述的利福昔明抗原的制备方法，包括如下步骤：将权利要求1所述化合物与载体蛋白通过酰胺键偶联，获得所述利福昔明抗原。6.根据权利要求5所述的利福昔明抗原的制备方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：（1）将所述化合物溶解于二甲基甲酰胺中，然后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，20-25℃磁力搅拌反应2-3h，得到溶液I；其中，所述化合物、所述二甲基甲酰胺、所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、所述N-羟基琥珀酰亚胺的配比为30.4mg：1.5ml：25.75mg：15.46mg；（2）将所述载体蛋白置于0.1M碳酸氢钠缓冲液中，200rpm搅拌10min，充分溶解，得到溶液II；所述载体蛋白与所述0.1M碳酸氢钠缓冲液的配比为33.6-50mg：3.5ml；其中，若所述载体蛋白为牛血清白蛋白，则所述牛血清白蛋白与所述0.1M碳酸氢钠缓冲液的配比为50mg：3.5ml；若所述载体蛋白为卵清蛋白，则所述卵清蛋白与所述0.1M碳酸缓冲液的配比为33.6mg：3.5ml；（3）将所述溶液I和所述溶液II混合，具体为在0-4℃条件下，1000rpm搅拌下，将溶液I逐滴加入到所述溶液II中，500rpm搅拌反应24h，得到溶液III；（4）用0.01MpH7.2磷酸盐缓冲液，于4℃对所述溶液III搅拌透析3天，得到所述利福昔明抗原。7.权利要求1所述化合物或权利要求3所述利福昔明抗原的应用，其特征在于定性或定量检测利福昔明；制备利福昔明抗体。2CN111560027A权利要求书2/2页8.利用权利要求3所述利福昔明抗原制备的抗体，其特征在于所述抗体为抗利福昔明单克隆抗体；所述抗利福昔明单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为序列表的序列1所示；所述抗利福昔明单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列为序列表的序列2所示。9.根据权利要求3所述的利福昔明抗原，其特征在于可以用于制备酶联免疫试剂盒和胶体金检测卡。10.根据权利要求9所述的利福昔明抗原，其特征在于所述酶联免疫试剂盒和胶体金检测卡检测样本可以为动物肉或组织、液态奶，所述检测上述样本中利福昔明的检测限分别为10μg/kg、8μg/l，灵敏度为0.81μg/l。3CN111560027A说明书1/10页一种利福昔明半抗原、人工抗原及其制备方法与应用技术领域[0001]本发明属于药物残留快速检测领域，涉及一种利福昔明人工抗原及其制备方法与应用。背景技术[0002]利福昔明属于