一种用于定量分析CHO宿主细胞DNA残留的序列、引物及方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108929898A(43)申请公布日2018.12.04(21)申请号201810952388.3(22)申请日2018.08.20(71)申请人广州七谱生物医学科技有限公司地址510000广东省广州市广州高新技术产业开发区科学城掬泉路3号广州国际企业孵化器D区D1008号（自主申报）(72)发明人董先辉王晓香陈存款张娟钟健翔(74)专利代理机构北京细软智谷知识产权代理有限责任公司11471代理人赵芳(51)Int.Cl.C12Q1/6851(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书2页说明书16页附图8页(54)发明名称一种用于定量分析CHO宿主细胞DNA残留的序列、引物及方法(57)摘要本发明提供了一种用于定量分析CHO宿主细胞DNA残留的序列、引物、探针及方法。本发明在分析CHO细胞核酸重复序列的基础上，选择了一系列高度重复序列作为定量分析基因，使用Taqman探针法qPCR技术将检测灵敏度大大提高2个数量级(5pg/mL)，且在DNA浓度在5pg～50000ng/mL时有良好的线性范围(R2≥0.99)。CN108929898ACN108929898A权利要求书1/2页1.一种用于定量分析CHO宿主细胞DNA残留的序列，其特征在于，所述序列包括序列a、序列b、序列c、序列d、序列e、序列f、序列g、序列h、序列i和序列j中的任意一个或多个；所述序列a的序列如SEQIDNO：1所示，所述序列b的序列如SEQIDNO：2所示，所述序列c的序列如SEQIDNO：3所示，所述序列d的序列如SEQIDNO：4所示，所述序列e的序列如SEQIDNO：5所示，所述序列f的序列如SEQIDNO：6所示，所述序列g的序列如SEQIDNO：7所示，所述序列h的序列如SEQIDNO：8所示。2.权利要求1所述的序列对应的引物，其特征在于，所述引物包含分别对应序列a、序列b、序列c、序列d、序列e、序列f、序列g和序列h的序列a引物F、序列a引物R、序列b引物F、序列b引物R、序列c引物F、序列c引物R、序列d引物F、序列d引物R、序列e引物F、序列e引物R、序列f引物F、序列f引物R、序列g引物F、序列g引物R、序列h引物F、序列h引物R中的任意一组或多组；所述序列a引物F的序列如SEQIDNO：9所示，所述序列a引物R的序列如SEQIDNO：10所示，所述序列b引物F的序列如SEQIDNO：11所示，所述序列b引物R的序列如SEQIDNO：12所示，所述序列c引物F的序列如SEQIDNO：13所示，所述序列c引物R的序列如SEQIDNO：14所示，所述序列d引物F的序列如SEQIDNO：15所示，所述序列d引物R的序列如SEQIDNO：16所示，所述序列e引物F的序列如SEQIDNO：17所示，所述序列e引物R的序列如SEQIDNO：18所示，所述序列f引物F的序列如SEQIDNO：19所示，所述序列f引物R的序列如SEQIDNO：20所示，所述序列g引物F的序列如SEQIDNO：21所示，所述序列g引物R的序列如SEQIDNO：22所示，所述序列h引物F的序列如SEQIDNO：23所示，所述序列h引物R的序列如SEQIDNO：24所示。3.权利要求1所述的序列对应的探针，其特征在于，所述探针包括分别对应序列a、序列b、序列c、序列d、序列e、序列f、序列g和序列h的序列a探针、序列b探针、序列c探针、序列d探针、序列e探针、序列f探针、序列g探针和序列h探针；所述序列a探针的序列如SEQIDNO：25所示，所述序列b探针的序列如SEQIDNO：26所示，所述序列c探针的序列如SEQIDNO：27所示，所述序列d探针的序列如SEQIDNO：28所示，所述序列e探针的序列如SEQIDNO：29所示，所述序列f探针的序列如SEQIDNO：30所示，所述序列g探针的序列如SEQIDNO：31所示，所述序列h探针的序列如SEQIDNO：32所示。4.一种定量分析CHO宿主细胞DNA残留的方法，其特征在于，所述方法使用权利要求1-3中任意一组或多组序列及序列的引物和探针。5.根据权利要求4所述的定量分析CHO宿主细胞DNA残留的方法，其特征在于，包括以下步骤：A、处理蛋白样品，得到待测DNA溶液；B、使用一系列浓度梯度的CHO标准品，进行qPCR扩增，以标准品log10对数值为X轴，qPCR扩增Ct值为Y轴，制备标准曲线，并进行线性回归方程拟合获得线性方程；C、对步骤A得到的待测DNA溶液进行qPCR扩增，得到待测DNA溶液的qPCR扩增Ct值，进而根据步骤B得到的线性方程得到待测DNA溶液中CHODNA的含量。6.根据权利要求5所述的定量分析CH