一种CHO细胞宿主蛋白残留量检测方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115704821A(43)申请公布日2023.02.17(21)申请号202110900828.2(22)申请日2021.08.06(71)申请人成都康弘生物科技有限公司地址610036四川省成都市蜀西路108号(72)发明人屈琳柯潇(51)Int.Cl.G01N33/68(2006.01)G01N33/58(2006.01)G01N33/543(2006.01)G01N33/531(2006.01)权利要求书1页说明书8页序列表2页(54)发明名称一种CHO细胞宿主蛋白残留量检测方法(57)摘要本发明提供一种CHO细胞宿主蛋白残留量检测方法，所述方法包括配制含有表面活性剂的蛋白样品溶液，然后通过ELISA对蛋白样品溶液进行HCP检测，本发明提供了一种专属性强、准确度高、重复性好的CHO细胞宿主蛋白残留量检测方法，对蛋白的质量控制具有重要意义。CN115704821ACN115704821A权利要求书1/1页1.一种CHO细胞宿主蛋白(HCP)残留量的ELISA检测方法，其特征在于所述检测方法包含步骤：1)配制含有表面活性剂的蛋白样品溶液；2)通过ELISA对步骤1)所述的蛋白样品溶液进行HCP检测。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述表面活性剂选自吐温20或吐温80。3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于所述表面活性剂浓度为0.75wt％‑1.2wt％。4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于所述表面活性剂浓度为0.83wt％‑1wt％。5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述蛋白为康柏西普或阿柏西普。6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于所述蛋白样品溶液的浓度为0.92mg/ml‑1.38mg/ml，优选1mg/ml。7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于步骤1)中所述的样品溶液采用缓冲溶液进行配制，其中所述缓冲液型号为：CYGNUSI028‑100。8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于步骤2)中，将样品溶液加入碱性磷酸酶标记的HCP抗体中，形成抗原‑抗体复合物，孵育后然后加入显色液进行显色，405nm(测定波长)/492nm(参比波长)读数，通过HCP标准曲线计算待测样品溶液中的HCP含量。9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于显色液为对‑硝基苯磷酸酯(PNPP)。10.根据权利要求1‑9任一项所述的检测方法，其特征在于检测方法包括：1)利用CYGNUSI028‑100缓冲溶液配制含0.83wt％吐温20或吐温80的蛋白样品溶液，其中蛋白浓度为1mg/ml；2)将样品溶液加入碱性磷酸酶标记的HCP抗体中，形成抗原‑抗体复合物，孵育后然后加入显色液进行显色，405nm(测定波长)/492nm(参比波长)读数，通过HCP标准曲线计算待测样品溶液中的HCP含量。2CN115704821A说明书1/8页一种CHO细胞宿主蛋白残留量检测方法技术领域[0001]本发明涉及生物蛋白的质量控制领域，具体涉及一种CHO细胞宿主蛋白残留量检测样品处理及检测方法。背景技术[0002]许多抗体、疫苗或蛋白类药物的制备主要是通过生物体系合成，其中CHO细胞(中国仓鼠卵巢细胞)由于表达的蛋白最接近于天然蛋白分子、产物胞外分泌但很少分泌自身内源蛋白，对目标蛋白分离纯化工作十分有利，是目前被广泛使用的工程细胞具有表达遗传背景清楚、表达系统完善稳定、蛋白表达水平较高等优势。尽管采用多种方式进行纯化，但是CHO细胞仍然会有少量蛋白残留在生物制品的半成品和成品中，例如CHO细胞中残留的宿主蛋白(HCP)作为人类自身系统的外源蛋白，可能会在不同程度上引发机体的免疫应答，最终导致过敏反应或其他不良反应。因此需要建立合适的检测HCP的方法来监控最终生物制品或半成品的质量。[0003]ELISA是目前应用最广泛的HCP检测方法。该方法相对简单，精良度好，方便设定控制范围和建立技术规范。目前已经有多种商品化的ELISA试剂盒可以用于HCP的检测，还可以通过自制多克隆抗体进行检测。虽然目前的检测方法给HCP的检测原理和方法提供了一种通行的指引，但是很少有人关注到检测样品处理对检测结果的影响，申请人发现如果检测样品处理不当，可能影响HCP的检测效果，如回收率、准确性、精密度等。发明内容[0004]本发明为了解决现有技术中HCP检测的缺陷，提供了一种回收率高、准确度和精密度好的CHO细胞宿主蛋白(HCP)残留量的ELISA检测方法，包括：[0005]1)配制含有表面活性剂的待测蛋白样品溶液；[0006]2)通过ELISA对步骤1)所述的样品溶液进行HCP残留量检测。[0007]其中，所述表面活性剂选自吐温20或吐温80。在一些优选实施例中，所述表面活性剂