一种细胞外囊泡的提取方法及试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109825472A(43)申请公布日2019.05.31(21)申请号201910156434.3C12R1/19(2006.01)(22)申请日2019.03.01(71)申请人易春地址215028江苏省苏州市苏州工业园区星湖街218号苏州生物医药产业园一期A4楼216单元申请人方国伟陆路(72)发明人陆路(74)专利代理机构杭州千克知识产权代理有限公司33246代理人黎双华(51)Int.Cl.C12N5/078(2010.01)C12N5/071(2010.01)C12N1/20(2006.01)权利要求书1页说明书18页附图7页(54)发明名称一种细胞外囊泡的提取方法及试剂盒(57)摘要本发明涉及生物分离提取技术领域，具体涉及一种细胞外囊泡的提取方法。所述方法包括：提供生物样本；在足以使生物样本中杂质部分或全部保留在捕获表面之上的条件下，使所述生物样本经过至少两次与所述捕获表面接触；其中，所述杂质为生物样本中除细胞外囊泡之外的部分或全部的其他物质，所述捕获表面包括球状颗粒多孔材料的内表面和/或外表面；在杂质部分或全部保留在捕获物表面之上时，流穿液即为提取到包含细胞外囊泡的液体；或进一步对上述流穿液进行浓缩。本发明能够快速对细胞外膜囊泡的进行分离纯化，并且该分离操作简单，单次使用成本低，分离样本纯度高，样本生物活性保持良好，应用在生物标志物发现、生物治疗等方面的基础研究与工业生产中。CN109825472ACN109825472A权利要求书1/1页1.一种细胞外囊泡的提取方法，其特征在于，所述方法包括：提供生物样本；在足以使生物样本中杂质部分或全部保留在捕获表面之上的条件下，使所述生物样本经过至少两次与所述捕获表面接触；其中，所述杂质为生物样本中除细胞外囊泡之外的部分或全部的其他物质，所述捕获表面包括球状颗粒多孔材料的内表面和/或外表面；在杂质部分或全部保留在捕获物表面之上时，流穿液即为提取到包含细胞外囊泡的液体；或进一步对上述流穿液进行浓缩。2.根据权利要求1所述的一种细胞外囊泡的提取方法，其特征在于，所述方法包括：所述生物样本依次经过两个串联的层析柱后，所述杂质部分或全部保留在层析柱内填料的捕获表面，流穿液即为提取到的纯化后的细胞外囊泡，所述层析柱内填料为球状颗粒多孔材料。3.根据权利要求2所述的一种细胞外囊泡的提取方法，其特征在于，所述串联的两个层析柱中第一层析柱内球状颗粒多孔材料的内和外表面为阴离子交换基团官能化，阴离子交换基团为季胺基团或者叔胺基团。4.根据权利要求3所述的一种细胞外囊泡的提取方法，其特征在于，所述第一层析柱内球状颗粒多孔材料的内和外表面带正电荷。5.根据权利要求2所述的一种细胞外囊泡的提取方法，其特征在于，所述串联的两个层析柱中的第二层析柱内球状颗粒多孔材料内孔表面为阴离子交换基团官能化，阴离子交换基团为季胺基团或者叔胺基团。6.根据权利要求5所述的一种小细胞外囊泡的提取方法，其特征在于，所述第二层析柱的球状颗粒多孔材料内孔表面带正电荷。7.根据权利要求1或2所述的一种细胞外囊泡的提取方法，其特征在于，所述球状颗粒多孔材料的平均粒径为60-100μm，第一层析柱球状颗粒多孔材料的平均孔径小于等于30nm，第二层析柱球状颗粒多孔材料孔径最大排阻分子量小于400KD。8.根据权利要求1所述的一种细胞外囊泡的提取方法，其特征在于，细胞外囊泡为外泌体或外膜囊泡。9.根据权利要求2所述的一种细胞外囊泡的提取方法，其特征在于，所述生物样本通过层析柱内填料的线性流速为100-480cm/h。10.根据权利要求1所述的一种细胞外囊泡的提取方法，其特征在于，所述生物样本包括生物体液、细胞体外培养上清、微生物体外培养上清。11.根据权利要求10所述的一种细胞外囊泡的提取方法，其特征在于，所述的生物体液包括血浆/血清、尿液、脑脊液、眼泪、精液、羊水、胃液、唾液、胸水、腹水、鼻涕、支气管肺泡灌洗液、关节滑液、胆汁、子宫粘液和粪便。12.根据权利要求2所述的一种细胞外囊泡的提取方法，其特征在于，层析柱内填料的高度为6-35cm。13.根据上述任一项权利要求所述的一种细胞外囊泡的提取方法所采用的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒由第一层析柱和第二层析柱串联组成，其中，第一层析柱至少一根，第二层析柱至少一根，层析柱之间采用标准鲁尔接口连接。2CN109825472A说明书1/18页一种细胞外囊泡的提取方法及试剂盒技术领域[0001]本发明涉及生物分离提取技术领域，具体涉及一种细胞外囊泡的提取方法及试剂盒。背景技术[0002]细胞外囊泡(extracellularvesicles，EVs)是通过进化保守的途径，由包括从原核生物到更高级的真核生物与植物