一种利用黑曲霉分离提取5,5＇-氧代二(亚甲基)二呋喃-2-甲醛的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110004193A(43)申请公布日2019.07.12(21)申请号201811474684.3C12R1/685(2006.01)(22)申请日2018.12.04(71)申请人贵州大学地址550025贵州省贵阳市花溪区贵州大学（北区）科技处申请人贵州省烟草公司毕节市公司(72)发明人李祝陈雪代园凤唐婧红冉江张素张钦语杨佩斯(74)专利代理机构贵阳东圣专利商标事务有限公司52002代理人袁庆云(51)Int.Cl.C12P17/04(2006.01)C07D307/46(2006.01)C07D307/58(2006.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称一种利用黑曲霉分离提取5,5＇-氧代二(亚甲基)二呋喃-2-甲醛的方法(57)摘要本发明公开了一种利用黑曲霉分离提取5,5＇-氧代二(亚甲基)二呋喃-2-甲醛的方法，包括：取黑曲霉发酵菌丝体于电热恒温干燥箱中，45-60℃烘干粉碎成菌粉，称取菌粉8-10g，用菌粉与50mL丙酮在60℃水浴锅中回流3-4h，然后用纱布过滤开残渣得到提取液，再用同样的方法进行2次回流提取，收集三次总提取液，并将该提取液用旋转蒸发仪在温度40-60℃、压力为0.04-0.06MPa的条件下旋蒸至丙酮挥干，得浓缩液；硅胶柱层析、反向柱层析、羟丙基葡聚糖凝胶柱层析、再次柱层析，并用环己烷：丙酮=30:1进行洗脱，洗脱液浓缩干燥得白色粉末。本发明生产成本低，操作简单，重复性好，溶剂残留少且易回收，减少了能源的消耗和废气的排放，大大降低了环境污染。CN110004193ACN110004193A权利要求书1/1页1.一种利用黑曲霉分离提取5,5＇-氧代二(亚甲基)二呋喃-2-甲醛的方法，包括以下步骤：（1）浓缩液的制备取黑曲霉发酵菌丝体于电热恒温干燥箱中，45-60℃烘干粉碎成菌粉，称取菌粉8-10g，用菌粉与50mL丙酮在60℃水浴锅中回流3-4h，然后用纱布过滤开残渣得到提取液，再用同样的方法进行2次回流提取，收集三次总提取液，并将该提取液用旋转蒸发仪在温度40-60℃、压力为0.04-0.06MPa的条件下旋蒸至丙酮挥干，得浓缩液；（2）硅胶柱层析用石油醚湿法装柱得到硅胶层析柱，将步骤（1）得到的浓缩液用80mL的丙酮溶解并与200-300目硅胶拌样，挥干溶剂后干法上样；用石油醚：丙酮=1:0、50:1、20:1、10:1、5:1、2:1、1:1、0:1进行梯度洗脱，分段收集洗脱液，薄层层析跟踪检测，合并相同组分，用旋转蒸发仪在温度40-60℃、压力为0.04-0.06MPa的条件下旋蒸至丙酮挥干，得浓缩组分；（3）反向柱层析取步骤（2）制得的浓缩组分用80mL丙酮溶解后与200-300目硅胶拌样，挥干溶剂后湿法上反向硅胶柱，并用纯净水：甲醇=100：0、90:10、80:20、70:30、60:40、50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、0:100进行梯度洗脱，分段收集洗脱液，薄层层析跟踪检测，合并相同组分，用旋转蒸发仪在温度40-60℃、压力为0.04-0.06MPa的条件下旋蒸至丙酮挥干，得浓缩液；（4）羟丙基葡聚糖凝胶柱层析将羟丙基葡聚糖凝胶和氯仿：甲醇=1:1混悬得羟丙基葡聚糖凝胶柱，将步骤（3）制得的浓缩液用30mL甲醇溶解后上样，并用氯仿：甲醇=1:1在重力下自然洗脱，分段收集洗脱液，薄层层析跟踪检测，合并相同组分，用旋转蒸发仪在温度40-60℃、压力为0.04-0.06MPa的条件下旋蒸至有机溶剂挥干，得浓缩液；（5）再次柱层析将步骤（4）得到的浓缩液再次进行柱层析，并用环己烷：丙酮=30:1进行洗脱，洗脱液浓缩干燥得白色粉末，即为5,5＇-氧代二(亚甲基)二呋喃-2-甲醛类成分。2.如权利要求1所述的利用黑曲霉分离提取5,5＇-氧代二(亚甲基)二呋喃-2-甲醛的方法，其中：所述的黑曲霉是黑曲霉xj，保藏号为：CCTCCNO：M206021。2CN110004193A说明书1/4页一种利用黑曲霉分离提取5,5＇-氧代二(亚甲基)二呋喃-2-甲醛的方法技术领域[0001]本发明涉及化工技术领域，特别是涉及一种利用黑曲霉分离提取5,5＇-氧代二(亚甲基)二呋喃-2-甲醛的方法。[0002]背景技术[0003]黑曲霉是曲霉属黑曲霉群霉菌,为低等真核生物。菌丝体由具有横隔的分支菌丝构成,菌丛黑褐色,顶囊球形,小梗双层,分生孢子球形,平滑或粗糙。黑曲霉是集安全和具有许多活性强大酶系等诸多优点于一身的优良工业发酵用菌种。在发酵工业中地位不凡,应用非常广泛。黑曲霉是FDA认证的安全菌种,利用黑曲霉生产的酶制剂不仅安全、可靠,而且生长比较快、发酵周期也较短,具有非常明显的优越性。[000