一种利用黑曲霉分离提取吡唑草胺的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108409661A(43)申请公布日2018.08.17(21)申请号201810387265.X(22)申请日2018.04.26(71)申请人贵州大学地址550025贵州省贵阳市花溪区贵州大学西校区(72)发明人李祝张素冉江肖洋唐婧红张钦语(74)专利代理机构北京联创佳为专利事务所(普通合伙)11362代理人郭防张梅(51)Int.Cl.C07D231/12(2006.01)权利要求书2页说明书3页附图1页(54)发明名称一种利用黑曲霉分离提取吡唑草胺的方法(57)摘要本发明公开了一种利用黑曲霉分离提取吡唑草胺的方法，包括（1）浸膏的制备取黑曲霉发酵菌丝体置于鼓风干燥箱中，55℃烘至恒重，磨粉，过60目筛得菌粉，将菌粉用丙酮以1：4的重量比提取3次得黑曲霉提取液，并将该提取液浓缩至3%的浓度；（2）硅胶柱层析；（3）反向柱层析；（4）再次柱层析将步骤（3）中目标粗品再次进行硅胶柱处理，并用环己烷：丙酮洗脱，洗脱液浓缩干燥得白色粉末，即为吡唑草胺类成分。该方法具有底物廉价易得，提取工艺简单、易行，生产过程环保、溶剂残留少、污染低、培养基质容易获得等优点，为吡唑草胺今后的扩大生产提供了良好的前景。CN108409661ACN108409661A权利要求书1/2页1.一种利用黑曲霉分离提取吡唑草胺的方法，其特征在于：包括（1）浸膏的制备；（2）硅胶柱层析；（3）反向柱层析；（4）再次柱层析。2.如权利要求1所述的利用黑曲霉分离提取吡唑草胺的方法，其特征在于：具体包括以下步骤：（1）浸膏的制备取黑曲霉发酵菌丝体置于鼓风干燥箱中，55℃烘至恒重，磨粉，过60目筛得菌粉，将菌粉用丙酮以1：4的重量比提取3次得黑曲霉提取液，并将该提取液浓缩至3%的浓度；（2）硅胶柱层析用石油醚湿法装柱得到硅胶层析柱，将步骤（1）中浓缩液用溶剂溶解并与硅胶拌样，挥干溶剂后干法上样；用石油醚：丙酮梯度洗脱，分段收集洗脱液，薄层层析跟踪检测，合并相同组分，浓缩；（3）反向柱层析选取步骤（2）中极性适中浓缩组分用溶剂溶解与硅胶拌样，挥干溶剂后湿法上反向硅胶柱，并用纯净水：甲醇梯度洗脱，分段收集洗脱液，薄层层析跟踪检测，合并相同组分，浓缩得目标粗品；（4）再次柱层析将步骤（3）中目标粗品再次进行硅胶柱处理，并用环己烷：丙酮洗脱，洗脱液浓缩干燥得白色粉末，即为吡唑草胺类成分。3.如权利要求2所述的利用黑曲霉分离提取吡唑草胺的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述的将菌粉用丙酮以1：4的重量比提取3次得黑曲霉提取液；是将菌粉用丙酮以1：4的重量比，在加热温度为50-100℃，压力为0-1.0MPa条件下提取3次得黑曲霉提取液，时间为每次3h。4.如权利要求2所述的利用黑曲霉分离提取吡唑草胺的方法，其特征在于：所述步骤（1）、步骤（2）、步骤（3）和/或步骤（4）中的浓缩是指采用旋转蒸发仪在温度40-60℃、压力为0.04-0.06MPa的条件下旋蒸至有机溶剂挥干。5.如权利要求2所述的利用黑曲霉分离提取吡唑草胺的方法，其特征在于：步骤（2）、步骤（3）和/或所述步骤（4）中所述的硅胶颗粒尺寸为200-300目。6.如权利要求2所述的利用黑曲霉分离提取吡唑草胺的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述的用石油醚：丙酮梯度洗脱是；按石油醚：丙酮=1:0、50:1、20:1、10:1、5:1、2:1、1:1、0:1进行洗脱。7.如权利要求2所述的利用黑曲霉分离提取吡唑草胺的方法，其特征在于：步骤（3）中，所述并用纯净水：甲醇梯度洗脱是；按纯净水：甲醇=60:40、50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、0:100进行洗脱。8.如权利要求2所述的利用黑曲霉分离提取吡唑草胺的方法，其特征在于：步骤（4）中，所述的并用环己烷：丙酮洗脱是；按环己烷：丙酮=30:1进行洗脱。9.如权利要求2所述的利用黑曲霉分离提取吡唑草胺的方法，其特征在于：步骤（2）、步骤（3）和/或步骤（4）中的洗脱剂的流速为15mL/min。10.如权利要求1-9中任一项所述的利用黑曲霉分离提取吡唑草胺的方法，其特征在于：所述的黑曲霉是黑曲霉xj，保藏号为：CCTCCNO：M206021，名称为：黑曲霉xj2CN108409661A权利要求书2/2页（Aspergillusnigerxj）。3CN108409661A说明书1/3页一种利用黑曲霉分离提取吡唑草胺的方法技术领域[0001]本发明涉及一种吡唑草胺的分离提取方法，特别是利用黑曲霉分离提取吡唑草胺的方法。背景技术[0002]吡唑草胺(metazachlor)化学名称2-氯-N-(2,-二甲基苯基)-N-(1H-吡唑-1-基甲基)乙酰胺，是德国巴斯夫公司（BAS