一种利用黑曲霉孢子粉分离提取5-羟甲基-呋喃甲酸的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110511198A(43)申请公布日2019.11.29(21)申请号201910819828.2A01P1/00(2006.01)(22)申请日2019.08.31C12R1/685(2006.01)(83)生物保藏信息CCTCCNO：M2060212006.03.07(71)申请人贵州大学地址550025贵州省贵阳市花溪区贵州大学（北区）科技处(72)发明人李祝张钦语肖洋郭堃冉江(74)专利代理机构贵阳东圣专利商标事务有限公司52002代理人袁庆云(51)Int.Cl.C07D307/68(2006.01)C12P17/04(2006.01)A01N43/08(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图3页(54)发明名称一种利用黑曲霉孢子粉分离提取5-羟甲基-呋喃甲酸的方法(57)摘要本发明公开了一种利用黑曲霉孢子粉分离5-羟甲基-呋喃甲酸的方法，经过乙醇回流提取黑曲霉孢子粉中活性物质，并用石油醚萃取粗体活性物，通过对青枯雷尔式菌的活性追踪，有目的的对5-羟甲基-呋喃甲酸进行定向分离。本发明菌株来源可靠，对温度、pH等自然环境条件的适应范围广，容易培养和保存，底物廉价易得，提取工艺简单易行，生产过程环保、溶剂残留少、污染低。CN110511198ACN110511198A权利要求书1/1页1.一种利用黑曲霉孢子粉分离5-羟甲基-呋喃甲酸的方法，包括以下步骤：（1）粗提物的制备黑曲霉经麦麸发酵收集孢子粉后经喷雾干燥制成菌粉备用，质量比为1:3的菌粉与乙醇，在一个标准大气压下、温度为40-60℃下回流提取3次，每次3h，得黑曲霉孢子粉提取液，减压浓缩至总体积的1/10-1/5后加等体积的水溶解，水溶液与等体积的石油醚萃取得石油醚萃取液，再经减压浓缩至石油醚挥干，得粗提物；（2）硅胶柱层析将粗提物用等体积石油醚溶解后，用40～80目硅胶按体积比为1:1.2拌样，同时水浴挥干石油醚后上样在已制备好的200～300目硅胶层析柱上进行常压硅胶柱洗脱；洗脱梯度为100%石油醚，石油醚:丙酮=100:1、50:1、20:1、10:1、5:1、2:1、1:1，100%丙酮等比例洗脱，流速为10～20ml/min，通过薄层层析色谱分析，观察5%的浓硫酸乙醇溶液和0.8%磷钼酸乙醇溶液的显色情况,选取物质成点情况和Rf值相同的流分合并，减压浓缩至有机溶剂挥干，得不同浓缩液；（3）反向柱层析选取对青枯雷尔式菌活性抑制率为80%以上的浓缩液，用40～80目硅胶按体积比为1:1.2拌样，同时水浴挥干混合溶剂后上样在已制备好的反向硅胶柱上进行反向柱层析，洗脱梯度为100%水，水:丙酮=90:10、80:20、70:30、60:40、50:50、40:60、30:70、20:80、10:90，100%丙酮等比例洗脱，流速为20～25ml/min，通过薄层层析色谱分析，观察5%的浓硫酸乙醇溶液和0.8%磷钼酸乙醇溶液的显色情况,选取物质成点情况和Rf值相同的流分合并，减压浓缩至有机溶剂挥干，得不同浓缩组分；（4）再次硅胶柱层析同样选取对青枯雷尔式菌活性抑制率为80%以上的浓缩液，再次进行硅胶层析，用体积比为1:1氯仿甲醇混合溶液溶解浓缩液后与40～80目硅胶按体积比为1:1.2拌样，同时水浴挥干混合溶剂后上样在已制备好的200～300目硅胶层析柱上进行常压硅胶柱洗脱；流速为20～25ml/min，洗脱体系为石油醚:丙酮=5:2，根据薄层层析色谱分析，分段收集、合并洗脱液，减压浓缩，干燥后的灰色粉末，即得5-羟甲基-呋喃甲酸。2.如权利要求1所述利用黑曲霉孢子粉分离提取5-羟甲基-呋喃甲酸的方法，其中：黑曲霉为黑曲霉xj（Aspergillusnigerxj），保藏号：CCTCCNO：M206021。2CN110511198A说明书1/5页一种利用黑曲霉孢子粉分离提取5-羟甲基-呋喃甲酸的方法技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，具体来说涉及一种利用黑曲霉孢子粉分离提取5-羟甲基-呋喃甲酸的方法。[0002]背景技术[0003]5-羟甲基-呋喃甲酸（5-Hydroxymethyl-2-furancarboxylicacid）是5-羟甲基-糠醛的合成过程中重要的副产物之一，一直通过化学合成的方法获得。其在农业上常用来缩合制备咪唑类杀菌剂，而5-羟甲基-呋喃糠醛的合成常用苯二甲酸作为原料进行合成，目前文献报道合成苯二甲酸的大多数方法以石油为基础原料来生产；5-羟甲基-呋喃甲酸的合成过程反应复杂且条件繁琐，反应产率不高且副产物较多；而生物来源的5-羟甲基-呋喃甲酸不需要通过以石油为原料进行合成，分离提取到的化合物成分单一，可规避母核合成过程，减少不可再生资源的利用。目前没有报