一种地龙蛋白肽及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110283228A(43)申请公布日2019.09.27(21)申请号201910543229.2C07K1/36(2006.01)(22)申请日2019.06.21A61K38/01(2006.01)A61P7/02(2006.01)(71)申请人山东天久生物技术有限公司地址274108山东省菏泽市开发区陈集镇工业区申请人中食都庆（山东）生物技术有限公司(72)发明人戴军张九勋张钊张学军田明展张西平魏玮张文婷其他发明人请求不公开姓名(74)专利代理机构北京高沃律师事务所11569代理人董大媛(51)Int.Cl.C07K1/14(2006.01)C07K1/16(2006.01)C07K1/34(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图4页(54)发明名称一种地龙蛋白肽及其制备方法和应用(57)摘要本发明提供了一种地龙蛋白肽及其制备方法和应用，属于蚯蚓深加工技术领域，所述方法包括以下步骤：1)将地龙蛋白与柠檬酸水溶液混合后，0～20℃提取4～8h，获得提取料液；2)将所述提取料液进行固液分离，收集液相组分获得提取清液；3)将所述提取清液依次经过超滤、有机膜过滤获得滤液；4)将所述滤液经过液相色谱纯化、干燥获得地龙蛋白多肽。所述方法制备获得的地龙蛋白肽富含纤溶蛋白溶解酶，有助于溶解血栓；本发明中所述方法最大限度的保留地龙蛋白的活性；工艺简单，可操作性高，原料易得，适合工业化大批量生产。CN110283228ACN110283228A权利要求书1/1页1.一种地龙蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将地龙蛋白与柠檬酸水溶液混合后，0～20℃提取4～8h，获得提取料液；2)将所述提取料液进行固液分离，收集液相组分获得提取清液；3)将所述提取清液依次经过超滤、有机膜过滤获得滤液；4)将所述滤液经过液相色谱纯化、干燥获得地龙蛋白多肽。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述柠檬酸水溶液的浓度为0.45～0.55mol/L。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述地龙蛋白与柠檬酸水溶液的质量比为1：(13～18)。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中所述超滤为陶瓷膜超滤，所述陶瓷膜的孔径为0.8～1.2μm。5.根据权利要求1或4所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中所述有机膜的截留分子量为10000D。6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中所述超滤和有机膜过滤的温度独立为24～26℃。7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中所述提取清液中固含量为4～6％。8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4)中所述干燥为冷冻干燥。9.权利要求1～8任意一项所述制备方法制备获得的地龙蛋白肽。10.权利要求1～8任意一项所述制备方法制备获得的地龙蛋白肽在制备预防血栓药物中的应用。2CN110283228A说明书1/6页一种地龙蛋白肽及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于蚯蚓深加工技术领域，尤其涉及一种地龙蛋白肽及其制备方法和应用。背景技术[0002]地龙，即蚯蚓，是我国重要中药材之一，在《神农本草经》中列为下品，具有清热定惊、通络、平喘、利尿的功效。地龙体内富含蛋白质，以干体计，蛋白含量为56～66％，为大豆的1.5倍，稻谷的6倍。地龙蛋白质中含有多种游离氨基酸，它们是地龙最主要的营养成分。其蛋白质由18种氨基酸组成，其中以亮氨酸和谷氨酸的含量最高，每百克样品分别含22.161克和6.227克，其次有天冬氨酸、缬氨酸、赖氨酸、精氨酸、丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、苏氯酸、苯丙氨酸、脯氨酸、组氨酸和酪氨酸等，包括了人体必需的8种游离氨基酸。蚯蚓是一种全价动物性蛋白源。[0003]地龙蛋白肽是将地龙蛋白进行进一步的水解和纯化获得的小分子多肽，现有的地龙蛋白肽多采用生物酶解的方法，例如中国专利CN107760747A中公开了以地龙蛋白为原料，采用风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶多酶酶解，然后通过灭酶、离心、过滤、浓缩、脱色和喷雾干燥等工序，制得地龙蛋白活性肽。提取条件苛刻，操作复杂，成本高。发明内容[0004]有鉴于此，本发明的目的在于提供一种操作简单、纯度高的地龙蛋白肽及其制备方法和应用。[0005]为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：[0006]一种地龙蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：1)将地龙蛋白与柠檬酸水溶液混合后，0～20℃提取4～8h，获得提取料液；2)将所述提取料液进行固液分离，收集液相组分获得提取清液；3)将所述提取清液依次经过超滤、有机膜过滤获得滤液；4)将所述滤液经过液相色谱纯化、干燥获得地龙蛋白多肽。[000