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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112679573A(43)申请公布日2021.04.20(21)申请号202110082289.6(22)申请日2021.01.21(71)申请人广东莞垄农业生态科技有限公司地址523570广东省东莞市常平镇环常西路16号1单元509室(72)发明人孔作万叶世豪黄挺薛红(74)专利代理机构北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙)11350代理人汤东凤(51)Int.Cl.C07K1/14(2006.01)C07K2/00(2006.01)A61P31/04(2006.01)权利要求书1页说明书2页(54)发明名称一种地龙抗菌肽的制备方法及其应用(57)摘要本发明公开了一种地龙抗菌肽的制备方法,包括以下步骤:S1、蚯蚓在3‑5h超声波诱导时,向烧杯内注入少许0.05mol/L磷酸盐缓冲液;S2、诱导时间完成后,用5V电压对蚯蚓进行电击,用移液器收集电击后蚯蚓分泌的黄色液体;S3、提取S2蚯蚓分泌的黄色液体放入1.5ml离心管,在2‑6℃下,3000r/min离心30min,S4、收集S3离心后的上清液,放入‑100~‑75℃冰箱冻存;S5、将S4中冻存后的粗提液转入冷冻真空干燥机内浓缩,干燥后取出,迅速放入‑80℃冰箱冻存。本发明具有良好的抑制细菌生长活性,既可杀灭或抑制细菌,其广谱抗菌特性是传统抗生素所无法比拟的。抗菌肽通过中和电荷的方法与细菌细胞膜相互作用,以此穿透杀死细菌,极大地减少了细菌产生耐药性的可能。CN112679573ACN112679573A权利要求书1/1页1.一种地龙抗菌肽的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、蚯蚓在3‑5h超声波诱导时,向烧杯内注入少许0.05mol/L磷酸盐缓冲液;S2、诱导时间完成后,用5V电压对蚯蚓进行电击,用移液器收集电击后蚯蚓分泌的黄色液体;S3、提取S2蚯蚓分泌的黄色液体放入1.5ml离心管,在2‑6℃下,3000r/min离心30min,S4、收集S3离心后的上清液,放入‑100~‑75℃冰箱冻存;S5、将S4中冻存后的粗提液转入冷冻真空干燥机内浓缩,干燥后取出,迅速放入‑80℃冰箱冻存。2.根据权利要求1所述的一种地龙抗菌肽的制备方法,其特征在于,S1中向烧杯内注入0.5‑2ml的0.05mol/L磷酸盐缓冲液。3.根据权利要求1所述的一种地龙抗菌肽的制备方法,其特征在于,S3中,提取S2蚯蚓分泌的黄色液体放入1.5ml离心管,在4℃下,3000r/min离心30min。4.根据权利要求1所述的一种地龙抗菌肽的制备方法,其特征在于,S4中,收集S3离心后的上清液,放入‑80℃冰箱冻存。5.一种地龙抗菌肽的应用,其特征在于,通过中和电荷的方法与细菌细胞膜相互作用,以此穿透杀死细菌。2CN112679573A说明书1/2页一种地龙抗菌肽的制备方法及其应用技术领域[0001]本发明涉及抗菌肽制备技术领域,尤其涉及一种地龙抗菌肽的制备方法及其应用。背景技术[0002]土壤/污水污染物的种类繁多,按性质分析:主要分为化学污染物/物理污染物/生物污染物/放射性污染物,含无机污染物和有机污染物,涉含汞、镉、铅、砷等重金属以及过量的氮/磷植物营养元素和氧化物、硫化物和氟化物等;涉各种化学农药、农膜、包装、除草剂、洗涤剂、石油及其裂解产物和酚类等,包括有机合成产物和生活工矿业污染物等。本发明以蚯蚓(蚯蚓又称地龙)自然动态催化吸收污水含寄生虫/病原菌和病毒/肠道细菌/炭疽杆菌肠/结合杆菌类等,让蚯蚓群深度自然优化共代谢转化为有机绿康肥王。但是目前还没有将蚯蚓作为抗菌抑制应用到生产当中去。发明内容[0003]本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点,而提出的一种地龙抗菌肽的制备方法。[0004]为了实现上述目的,本发明采用了如下技术方案:[0005]一种地龙抗菌肽的制备方法,包括以下步骤:[0006]S1、蚯蚓在3‑5h超声波诱导时,向烧杯内注入少许0.05mol/L磷酸盐缓冲液;[0007]S2、诱导时间完成后,用5V电压对蚯蚓进行电击,用移液器收集电击后蚯蚓分泌的黄色液体;[0008]S3、提取S2蚯蚓分泌的黄色液体放入1.5ml离心管,在2‑6℃下,3000r/min离心30min,[0009]S4、收集S3离心后的上清液,放入‑100~‑75℃冰箱冻存;[0010]S5、将S4中冻存后的粗提液转入冷冻真空干燥机内浓缩,干燥后取出,迅速放入‑80℃冰箱冻存。[0011]优选地,S1中向烧杯内注入0.5‑2ml的0.05mol/L磷酸盐缓冲液。[0012]优选地,S3中,提取S2蚯蚓分泌的黄色液体放入1.5ml离心管,在4℃下,3000r/min离心30min。[0013]优选地,S4中,收集S3离心后的上