一种穿透肽TDP、融合穿透肽蛋白及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113845574A(43)申请公布日2021.12.28(21)申请号202111437298.9A61K47/64(2017.01)(22)申请日2021.11.30A61K38/18(2006.01)A61K38/20(2006.01)(71)申请人百益美恒（北京）科技有限公司A61K38/21(2006.01)地址100000北京市海淀区开拓路5号5层A61K9/127(2006.01)519-32A61P17/00(2006.01)(72)发明人雷建军A61P17/02(2006.01)(74)专利代理机构北京众达德权知识产权代理有限公司11570代理人潘行(51)Int.Cl.C07K14/00(2006.01)C07K19/00(2006.01)C12N15/62(2006.01)C12N15/70(2006.01)A61K47/65(2017.01)权利要求书1页说明书8页序列表1页附图5页(54)发明名称一种穿透肽TDP、融合穿透肽蛋白及其制备方法和应用(57)摘要本申请涉及小分子肽的应用领域，尤其涉及一种穿透肽TDP、融合穿透肽蛋白及其制备方法和应用；所述穿透肽TDP的氨基酸序列为KETWWETWWTEWSQPKKRKKV；所述融合穿透肽蛋白包括穿透肽TDP、连接肽和生长因子；所述方法包括：得到细胞生长因子成熟肽的氨基酸序列；分别在氨基酸序列的氨基端和羧基端设计穿透肽和连接肽；根据穿透肽、连接肽和氨基酸序列，得到核苷酸序列；将核苷酸序列加上内切酶位点，得到目标DNA片段；将目标DNA片段构建转化子；根据核苷酸序列，判断转化子的核苷酸序列是否合格；将表达菌体进行培养和纯化，得到融合穿透肽蛋白；通过设计穿透肽的氨基酸序列，提高细胞生长因子的表皮吸收和透皮效果。CN113845574ACN113845574A权利要求书1/1页1.一种穿透肽TDP，其特征在于，所述穿透肽的氨基酸序列为KETWWETWWTEWSQPKKRKKV，所述穿透肽的氨基酸序列具体如SEQIDNO.1所示。2.一种融合穿透肽蛋白，其特征在于，所述穿透肽蛋白包括如权利要求1所述的穿透肽TDP、连接肽和生长因子，所述穿透肽蛋白的组合通式为：穿透肽+连接肽+细胞生长因子，或细胞生长因子+链接肽+穿透肽，或穿透肽+连接肽+细胞生长因子+链接肽+穿透肽。3.根据权利要求2所述的融合穿透肽蛋白，其特征在于，所述细胞生长因子包括：转化生长因子‑β、表皮生长因子、血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子、神经生长因子、血小板衍生的生长因子、肝细胞生长因子、肥大细胞生长因子、干扰素和白介素中至少一种。4.根据权利要求2所述的融合穿透肽蛋白，其特征在于，所述连接肽包括：甘氨酸、丝氨酸或甘氨酸和丝氨酸的组合物。5.根据权利要求2所述的融合穿透肽蛋白，其特征在于，所述融合穿透肽蛋白的表达载体包括细菌载体、酵母菌载体或哺乳动物细胞载体。6.一种制备如权利要求2‑4任一项所述的融合穿透肽蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括：得到细胞生长因子成熟肽的氨基酸序列；在所述氨基酸序列的氨基端设计第一穿透肽和第一连接肽；在所述氨基酸序列的羧基端设计第二穿透肽和第二连接肽；根据所述第一穿透肽、所述第一连接肽、所述第二穿透肽、所述第二连接肽和所述氨基酸序列，得到核苷酸序列；将所述核苷酸序列的5’端和3’端分别加上内切酶位点，得到目标DNA片段；将所述目标DNA片段构建到酶切载体上，后转化受体菌，得到转化子；根据所述核苷酸序列，判断所述转化子的核苷酸序列是否合格；若是，则将所述转化子进行诱导验证，后进行放大培养得到表达菌体；将所述表达菌体进行培养和纯化，得到融合穿透肽蛋白。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述第一连接肽的氨基酸序列为MKETWWETWWTEWSQPKKRKKVGGGGS，所述第一连接肽的氨基酸序列具体如SEQIDNO.2所示。8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述第二连接肽的氨基酸序列为GGGGSKETWWETWWTEWSQPKKRKKV，所述第二连接肽的氨基酸序列具体如SEQIDNO.3所示。9.一种外用制剂的组合物，其特征在于，所述组合物为包裹有权利要求1所述的穿透肽和细胞生长因子的组合物的脂质体，或包裹有如权利要求2‑4任一项所述的融合穿透肽蛋白的脂质体，其中，所述脂质体的原料为天然或合成的磷脂。10.一种如权利要求2‑4任一项所述的融合穿透肽蛋白的应用，其特征在于，将所述融合穿透肽蛋白用于临床治疗和医疗美容中。2CN113845574A说明书1/8页一种穿透肽TDP、融合穿透肽蛋白及其制备方法和应用技术领域[0001]本申请涉及小分子肽的应用领域，尤其涉及一种穿透肽TDP