牦牛肉中喹诺酮类药物时间分辨荧光免疫层析定量检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110702896A(43)申请公布日2020.01.17(21)申请号201910966460.2G01N33/577(2006.01)(22)申请日2019.10.12G01N33/58(2006.01)(71)申请人青海省动物疫病预防控制中心地址810008青海省西宁市胜利路69号申请人北京维德维康生物技术有限公司(72)发明人王云平张汉青赵维章刘河冰马立才张正英刘海珍张沛黄文颖郝云晴都占林(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司11245代理人白艳(51)Int.Cl.G01N33/53(2006.01)G01N33/533(2006.01)G01N33/558(2006.01)权利要求书2页说明书12页序列表2页附图1页(54)发明名称牦牛肉中喹诺酮类药物时间分辨荧光免疫层析定量检测方法(57)摘要本发明公开了牦牛肉中喹诺酮类药物时间分辨荧光免疫层析定量检测方法。本发明提供了检测试剂卡，包括底板和放置在其上的样品垫、含有铕微球标记的抗喹诺酮类药物抗体的释放垫、含有喹诺酮类药物检测线T以及质控线C的硝酸纤维素膜，和吸水垫。上述试剂卡中，所述抗喹诺酮类药物抗体为抗环丙沙星单克隆抗体；所述抗环丙沙星单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列为1；所述抗环丙沙星单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为2。本发明通过建立时间分辨荧光免疫层析方法来检测牦牛肉中环丙沙星残留量，其灵敏度高于ELISA方法。CN110702896ACN110702896A权利要求书1/2页1.一种喹诺酮类药物时间分辨荧光免疫检测试剂卡，包括底板和放置在其上的样品垫、含有铕微球标记的抗喹诺酮类药物抗体的释放垫、含有喹诺酮类药物检测线T以及质控线C的硝酸纤维素膜，和吸水垫。2.根据权利要求1所述的试剂卡，其特征在于：所述抗喹诺酮类药物抗体为抗环丙沙星单克隆抗体；所述抗环丙沙星单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列为1；所述抗环丙沙星单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为2。3.根据权利要求2所述的试剂卡，其特征在于：所述含有铕微球标记的抗喹诺酮类药物抗体的释放垫为将铕微球标记的抗环丙沙星抗体溶液喷于释放垫上形成；所述铕微球标记的抗环丙沙星抗体溶液的包被浓度为1.4mg/mL。4.根据权利要求3所述的试剂卡，其特征在于：所述铕微球标记的抗环丙沙星抗体溶液中，所述抗环丙沙星抗体和铕微球的质量比为7：20；或，所述铕微球为200nm羧基化铕微球。5.根据权利要求1-4中任一所述的试剂卡，其特征在于：所述喹诺酮类药物检测线T由环丙沙星抗原或其溶液形成；或，所述环丙沙星抗原溶液的包被浓度具体为1.0mg/mL；或，所述质控线C由IgG抗体或IgG抗体溶液形成；或，所述IgG抗体溶液的包被浓度具体为0.875mg/mL；或，所述含有喹诺酮类药物检测线T以及质控线C的硝酸纤维素膜为将所述环丙沙星抗原溶液包被在硝酸纤维素膜形成检测线T，且将所述IgG抗体溶液包被在硝酸纤维素膜形成质控线C，得到含有喹诺酮类药物检测线T和质控线C的硝酸纤维素膜。6.一种制备权利要求1-5中任一所述的试剂卡的方法，包括如下步骤：先制备含有铕微球标记的抗喹诺酮类药物抗体的释放垫和制备含有喹诺酮类药物检测线T和质控线C的硝酸纤维素膜；再将样品垫、所述含有铕微球标记的抗喹诺酮类药物抗体的释放垫、所述含有喹诺酮类药物检测线T和质控线C的硝酸纤维素膜和吸水垫组装到底板上，得到试剂卡；所述含有铕微球标记的抗喹诺酮类药物抗体的释放垫为将铕微球标记的抗喹诺酮类药物抗体溶液喷于释放垫上形成；所述铕微球标记的抗环丙沙星抗体溶液的浓度为1.4mg/mL；所述抗喹诺酮类药物抗体为抗环丙沙星单克隆抗体；所述抗环丙沙星单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列为1；所述抗环丙沙星单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为2；所述喹诺酮类药物检测线T由环丙沙星抗原或其溶液形成；或，所述环丙沙星抗原溶液的包被浓度具体为1.0mg/mL；所述质控线C由IgG抗体或IgG抗体溶液形成；或，所述IgG抗体溶液的浓度具体为0.875mg/mL；所述含有喹诺酮类药物检测线T以及质控线C的硝酸纤维素膜为将所述环丙沙星抗原溶液包被在硝酸纤维素膜形成检测线T，且将所述IgG抗体溶液包被在硝酸纤维素膜形成质控线C，得到含有喹诺酮类药物检测线T和质控线C的硝酸纤维素膜。2CN110702896A权利要求书2/2页7.权利要求1-6中任一中的所述试剂卡在制备检测或辅助检测喹诺酮类药物产品中的应用；或权利要求1-6中任一中的所述试剂卡在制备检测或辅助检测待测样品中是否含有喹诺酮类药物产品中的应用；或权利要求1-6中任一中的所述试剂卡在制备检测或辅助检测待测样品中喹诺酮类药物含量产品中的应用；或