一种交联微球及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111269444A(43)申请公布日2020.06.12(21)申请号202010075349.7C08L89/00(2006.01)(22)申请日2020.01.22C08L5/08(2006.01)C12N5/071(2010.01)(71)申请人苏州新丝原生物科技有限公司地址215000江苏省苏州市自由贸易试验区苏州片区苏州工业园区新平街388号23幢2层01单元(72)发明人孙振华左丽娜施坤宁丁升祥杨慧莹蒋雪峰(74)专利代理机构北京林达刘知识产权代理事务所(普通合伙)11277代理人刘新宇李茂家(51)Int.Cl.C08J3/24(2006.01)C08J3/12(2006.01)C08J9/28(2006.01)权利要求书3页说明书15页附图13页(54)发明名称一种交联微球及其制备方法和应用(57)摘要本发明属于生物组织工程细胞支架材料领域，涉及一种交联微球及其制备方法和应用。该方法先通过喷雾冷冻干燥方式制备出壳聚糖-明胶物理混合微球，然后使物理混合微球中的氨基和羧基进行化学交联，从而制备交联微球。不仅解决了由单用喷雾冷冻方式导致的微球结构不稳定的问题，同时联用壳聚糖和明胶可以提高微球的细胞黏附特性，以其作为微载体可以提高细胞培养效率，既可二维静态培养，也可三维动态培养。本发明中的壳聚糖和明胶原料成本低，物理混合微球和化学交联微球的大规模生产成本低，且无有毒物质残留，可进行大规模细胞培养，在体内注射方面具有极大的应用前景。CN111269444ACN111269444A权利要求书1/3页1.一种壳聚糖-明胶交联微球的制备方法，其包括下列步骤：1)将壳聚糖加入到酸溶液中，在温度A条件下溶解，得到壳聚糖溶液；将明胶加入到水中，在温度B条件下溶解，得到明胶溶液；将壳聚糖溶液与明胶溶液混合，得到壳聚糖-明胶混合溶液；将壳聚糖-明胶混合溶液喷雾冷冻并冻干，得到壳聚糖-明胶物理混合微球；2)将步骤1)中的壳聚糖-明胶物理混合微球加入到洗涤溶剂A中洗涤，过滤，将截留物加入到交联剂溶液中，在温度C条件下交联，过滤，将截留物中加入到pH调节剂中中和，过滤，将截留物加入到洗涤溶剂B中振荡，将沉淀物冻干，得到壳聚糖-明胶交联微球。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述壳聚糖的脱乙酰度为70％-100％，优选80％-98％；所述壳聚糖的粘度为1-200mPa.s，优选5-120mPa.s；所述酸为氯化氢、甲酸、冰醋酸、乳酸、苹果酸或抗坏血酸，优选冰醋酸；所述酸溶液为所述酸的水溶液，其质量浓度为0.5-10g/100mL，优选为1-3g/100mL；所述温度A为1-100℃，优选50-70℃；所述壳聚糖溶液的质量浓度为0.5-5g/100mL，优选1-3g/100mL。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述明胶为A型明胶或B型明胶，优选A型明胶；所述明胶在双冻力检测条件下的冻力度为160-250g/cm2，优选200-250g/cm2，更优选220-250g/cm2；所述水为去离子水；所述温度B为1-100℃，优选50-70℃；所述明胶溶液的质量浓度为0.5-20g/100mL，优选1-6g/100mL。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述壳聚糖与所述明胶的质量比为10:1-1:10，优选2:1-1:2；所述壳聚糖-明胶混合溶液的粘度不超过50mPa.s。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述混合采用机械搅拌装置、磁力搅拌装置或均质搅拌装置来完成，优选均质搅拌装置；所述喷雾冷冻采用喷雾冷却塔来完成；所述冻干采用冷冻干燥机来完成。6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述洗涤溶剂A为无水乙醇或其含水量在1％(v/v)以下的乙醇水溶液，优选无水乙醇；所述壳聚糖-明胶物理混合微球与所述洗涤溶液A的用量比为1g:100-1000mL，优选1g:200-600mL；所述洗涤的时间为1-48h，优选20-26h。7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述交联剂溶液为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺和2-(N-吗啉基)乙磺酸在乙醇或乙醇水溶液中，优选在30％-50％(v/v)乙醇水溶液中的溶液；所述交联剂溶液中1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺和2-(N-吗啉基)乙磺酸的摩尔浓度各自独立地为1-1000mM，优选200-400mM；2CN111269444A权利要求书2/3页所述壳聚糖-明胶物理混合微球与所述交联剂溶液的用量比为1g:100-400mL，优选1g:150-200mL；所述温度C为3-40℃，优选为33-37℃；所述交联的时间为1-10