一种细胞外囊泡循环分离纯化平台及方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111304049A(43)申请公布日2020.06.19(21)申请号201911252354.4(22)申请日2019.12.09(71)申请人华中科技大学地址430074湖北省武汉市洪山区珞喻路1037号(72)发明人刘笔锋陈鹏(74)专利代理机构华中科技大学专利中心42201代理人孙杨柳李智(51)Int.Cl.C12M1/00(2006.01)C12M1/12(2006.01)C12N5/00(2006.01)权利要求书2页说明书5页附图2页(54)发明名称一种细胞外囊泡循环分离纯化平台及方法(57)摘要本发明涉及一种细胞外囊泡循环分离纯化平台及方法，属于细胞外囊泡分离技术领域。样品管与循环泵连接，循环泵通过至少一个入口与过滤器连接；过滤器中设置有滤膜，滤膜用于截留大于该滤膜孔径的细胞外囊泡，并用于过滤杂质；滤膜用于将截留的部分通过至少一个上出口返回到样品管中，并用于将过滤的部分通过下出口进入收集管。将含有细胞外囊泡样品注入样品管，经循环泵导入到过滤器中，细胞外囊泡被滤膜截留并通过上出口返回至样品管中，而样品中的杂质及小分子穿过滤膜流至收集管，如此循环，就可以逐步富集浓缩样品中的细胞外囊泡，并有效去除背景杂质。将上述平台串联并加载不同孔径滤膜，可以实现不同尺寸下细胞外囊泡高效分离纯化。CN111304049ACN111304049A权利要求书1/2页1.一种细胞外囊泡循环分离纯化平台，其特征在于，包括样品管(1)、循环泵(2)、过滤器(3)、流速阀(4)和收集管(5)；所述样品管(1)与循环泵(2)连接，所述循环泵(2)通过至少一个入口(6)与过滤器(3)连接，所述循环泵(2)用于将待分离样液通过所述至少一个入口(6)泵入过滤器(3)；所述过滤器(3)中设置有滤膜(7)，所述滤膜(7)用于截留大于该滤膜(7)孔径的待分离样液中的细胞外囊泡，并用于过滤待分离样液中的杂质；所述滤膜(7)用于将截留的部分通过至少一个上出口(8)返回到样品管(1)中，所述上出口(8)与样品管(1)之间连接有流速阀(4)，所述流速阀(4)用于控制滤膜(7)截留的部分返回样品管(1)的速度；所述滤膜(7)用于将过滤的部分通过下出口(9)进入收集管(5)。2.如权利要求1所述的细胞外囊泡循环分离纯化平台，其特征在于，所述滤膜(7)的孔径为30nm-1000nm，所述滤膜(7)为亲水聚碳酸酯膜或多孔氧化铝膜。3.如权利要求1所述的细胞外囊泡循环分离纯化平台，其特征在于，所述入口(6)的数量为2-5个，所述上出口(8)的数量为2-5个。4.一种多级细胞外囊泡循环分离纯化平台，其特征在于，包括依次连接的至少两级细胞外囊泡循环分离纯化平台；任一级所述细胞外囊泡循环分离纯化平台包括样品管(1)、循环泵(2)、过滤器(3)和流速阀(4)，所述样品管(1)与循环泵(2)连接，所述循环泵(2)通过至少一个入口(6)与过滤器(3)连接，所述循环泵(2)用于将待分离样液通过所述至少一个入口(6)泵入过滤器(3)；所述过滤器(3)中设置有滤膜(7)，所述滤膜(7)用于截留待分离样液中大于该滤膜(7)孔径的细胞外囊泡，并用于过滤待分离样液中的杂质；所述滤膜(7)用于将截留的部分通过至少一个上出口(8)返回到样品管(1)中，所述上出口(8)与样品管(1)之间连接有流速阀(4)，所述流速阀(4)用于控制滤膜(7)截留的部分返回样品管(1)的速度；第一级至倒数第二级中任一级所述细胞外囊泡循环分离纯化平台的下出口(9)与下一级细胞外囊泡循环分离纯化平台的样品管(1)连接，最后一级细胞外囊泡循环分离纯化平台的下出口(9)与收集管(5)连接；各级所述细胞外囊泡循环分离纯化平台的滤膜(7)的孔径逐级减小。5.如权利要求4所述的多级细胞外囊泡循环分离纯化平台，其特征在于，各级所述细胞外囊泡循环分离纯化平台的滤膜(7)的孔径均为30nm-1000nm，各级所述细胞外囊泡循环分离纯化平台的滤膜(7)均为亲水聚碳酸酯膜或多孔氧化铝膜。6.如权利要求4所述的多级细胞外囊泡循环分离纯化平台，其特征在于，各级所述细胞外囊泡循环分离纯化平台的入口(6)的数量均为2-5个，各级所述细胞外囊泡循环分离纯化平台的上出口(8)的数量均为2-5个。7.运用权利要求1-3任一所述的细胞外囊泡循环分离纯化平台进行分离纯化细胞外囊泡的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：将待分离样液加入样品管(1)中，所述待分离样液通过循环泵(2)从入口(6)泵入过滤器(3)中；S2：所述待分离样液中孔径小于滤膜(7)孔径的杂质通过滤膜(7)，并通过下出口(9)进入收集管(5)中；所述待分离样液中孔径大于滤膜(7)孔径的细胞外囊泡被截留，并通过上出口(8