一种肿瘤细胞外囊泡DNA的分离纯化方法.pdf
是丹****ni
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一种肿瘤细胞外囊泡DNA的分离纯化方法.pdf
本发明属于生物技术领域,具体为一种肿瘤细胞外囊泡DNA的分离纯化方法,包括以下步骤:S1、将囊泡裂解液与含DNA的生物样本混匀后共孵育,得到裂解溶液;所述含DNA的生物样本为肿瘤细胞外囊泡;S2、向所述裂解溶液中加入沉淀液混匀,离心得到上清液;S3、向所述上清液中加入析出液,析出DNA并离心获得沉淀物;S4、用洗涤液对沉淀物进行洗涤,得到纯化的DNA。整个操作步骤简便,所需时间不超过40min,大大简化了肿瘤细胞外囊泡DNA的提取流程,同时提高了肿瘤细胞外囊泡DNA的提取效率和纯度。
一种细胞外囊泡循环分离纯化平台及方法.pdf
本发明涉及一种细胞外囊泡循环分离纯化平台及方法,属于细胞外囊泡分离技术领域。样品管与循环泵连接,循环泵通过至少一个入口与过滤器连接;过滤器中设置有滤膜,滤膜用于截留大于该滤膜孔径的细胞外囊泡,并用于过滤杂质;滤膜用于将截留的部分通过至少一个上出口返回到样品管中,并用于将过滤的部分通过下出口进入收集管。将含有细胞外囊泡样品注入样品管,经循环泵导入到过滤器中,细胞外囊泡被滤膜截留并通过上出口返回至样品管中,而样品中的杂质及小分子穿过滤膜流至收集管,如此循环,就可以逐步富集浓缩样品中的细胞外囊泡,并有效去除背景
胞外囊泡纯化方法.pdf
本公开提供一种大体积样液的胞外囊泡纯化方法。所述方法包括提供待制备胞外囊泡的样液,提取胞外囊泡;所述样液的体积以升计;将所述胞外囊泡加入排阻色谱柱中,等体积收集流下组分;选择并混合具有目标粒径或游离蛋白目标浓度的流下组分;将混合所得物转移至超滤管中离心,留取截留液,得到纯化胞外囊泡。所得胞外囊泡纯度高、可溶性杂蛋白污染小,实用性更加广泛,可满足后续NTA、电镜和蛋白组等分析。且操作简便,耗时短。
一种用于提高细胞外囊泡产量并促进细胞外囊泡包装目标蛋白的方法.pdf
本发明属于生物医药技术领域,具体涉及一种用于提高细胞外囊泡产量并促进细胞外囊泡包装目标蛋白的方法,本发明提供一种含肉豆蔻酰化肽段的装载系统编码质粒,将该载系统编码质粒单独在细胞中表达,能使细胞产生的EV数量明显增高;将该载系统编码质粒与目标蛋白货物在细胞中同时过表达,能使目标货物高效的装载至细胞产生的EV中。本发明的EV包装目标蛋白的方法操作简单,不需要将包装系统与目标货物以直接或间接的形式进行偶联,避免了对目标货物进行序列改造,同时避免了物理装载法可能导致的EV及货物完整性破坏,使货物与野生型蛋白质的序
一种从肿瘤细胞上清中分离微囊泡及其外泌体的方法.pdf
本发明公开了一种从肿瘤细胞上清中分离微囊泡及其外泌体的方法,所述方法为:将肿瘤细胞贴壁培养后,取培养液离心,取上清液与偶联复合物混合,在4℃、100‑300rpm水平振荡条件下孵育3‑16h,去除液体,获得孵育后的偶联复合物并用PBS缓冲液清洗,获得吸附微囊泡的偶联微球;本发明采用的方法提取的总微囊泡,保留了全部微囊泡的结构和成分,产量高。并且可以进行二次分选,对特定的微囊泡进行分析,提高了提取效率和研究价值。总共的提取时间最少只要4小时,就可以完成微囊泡的提纯,最少5小时可以完成外泌体的提纯。而且提取的