靶向于EGFR的抗体偶联药物、制备方法及应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112156184A(43)申请公布日2021.01.01(21)申请号202010928244.1(22)申请日2020.09.07(71)申请人上海中医药大学附属曙光医院地址200021上海市黄浦区普安路185号(72)发明人潘亚敏张林曦常文军朱江波(74)专利代理机构上海申浩律师事务所31280代理人赵建敏(51)Int.Cl.A61K39/395(2006.01)A61K47/54(2017.01)A61P35/00(2006.01)A61K31/56(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图5页(54)发明名称靶向于EGFR的抗体偶联药物、制备方法及应用(57)摘要本发明涉及生物技术和药物领域，具体涉及一种靶向于EGFR的抗体偶联药物、制备方法。该抗体偶联药物由抗体、细胞毒性药物以及连接子组成，抗体为西妥昔单克隆抗体，细胞毒性药物为雷公藤红素，连接子为琥珀酰亚胺酯接头。雷公藤红素先被改造成雷公藤红素琥珀酰亚胺酯形式，再与西妥昔单克隆抗体的酰胺键反应制得抗体偶联药物。该偶联物具有西妥昔单抗和雷公藤红素两者的协同生物学功能，既能够靶向EGFR抗原，又有强烈的杀伤肿瘤细胞的活性。且相较于Cetuximab本身，并未影响抗体的亲和力，抑制性和靶向性，较好的保留了其生物学功能。在体外活性评价中，相较于CTX与CLS单用以及联用，等浓度的Cetuximab‑SE‑Celastrol效果更佳，在二者的协同作用下，表现出明显的抗肿瘤效果。CN112156184ACN112156184A权利要求书1/1页1.一种靶向于EGFR的抗体偶联药物，其特征在于，该抗体偶联药物由抗体、细胞毒性药物以及连接子组成，所述抗体为西妥昔单克隆抗体，所述细胞毒性药物为雷公藤红素，所述连接子为琥珀酰亚胺酯接头，所述雷公藤红素先被改造成雷公藤红素琥珀酰亚胺酯形式，再与西妥昔单克隆抗体的酰胺键反应制得抗体偶联药物。2.根据权利要求1所述的靶向于EGFR的抗体偶联药物，其特征在于，所述的药物抗体偶联比为4。3.权利要求1所述的靶向于EGFR的抗体偶联药物的制备方法，包括以下步骤：(A)雷公藤红素羧基集团活化将雷公藤红素溶于干燥的DMF，加入1.2当量的琥珀酰亚胺酯接头和三乙胺，室温反应；检测反应完全后，加入乙醚沉降析出，得到雷公藤红素琥珀酰亚胺酯形式；(B)将步骤(A)中活化后的雷公藤红素溶于DMSO中，将西妥昔单抗用双蒸水溶解，再加入1/10体积的pH为8.8的碳酸钠溶液，而后将其加入至雷公藤红素溶液中；(C)4℃条件下孵育溶液4小时，孵育过程中每间隔一定时间轻轻翻动瓶子使两种反应物混合均匀，然后室温再孵育溶液4小时。4.根据权利要求3所述的靶向于EGFR的抗体偶联药物的制备方法，其特征在于，还包括(D)抗体偶联药物的纯化步骤：(D1)将步骤(C)得到的产物，先透析去除雷公藤红素，然后加入至sepharose4B层析柱中，置于摇床上室温反应2～4小时后，用0.01Mtrisbase洗涤柱子三次以上，洗掉未结合的杂蛋白，而后用0.1mol/L、pH2.5甘氨酸洗脱结合在柱子上的偶联药物；(D2)采用1mol/LNaHCO3溶液中和洗脱的偶联药物，而后将偶联药物溶液装入透析袋经PEG20000或者蔗糖浓缩8～10倍后，于0.01mol/LPBS中透析四次以上，每次换液间隔时间为1小时以上；(D3)将透析好的偶联药物用紫外可见分光光度计测定其在波长280nm处的吸光值，用吸光值除以1.35即为药物浓度，而后将所纯化的抗体加入30％-50％的甘油，并置于-20℃或者-80℃保存。5.根据权利要求3所述的靶向于EGFR的抗体偶联药物的制备方法，其特征在于：其中，步骤B中，雷公藤红素与西妥昔单抗间的摩尔比为1:1。步骤C中，4℃条件孵育过程中，每10～15min轻轻翻动瓶子使两种反应物混合均匀。6.一种如权利要求1或2所述的靶向于EGFR的抗体偶联药物在制备抗肿瘤药物中的应用。7.根据权利要求6所述的靶向于EGFR的抗体偶联药物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的肿瘤为EGFR阳性实体肿瘤。8.一种抗肿瘤药物组合物，其特征在于，以权利要求1或2所述的靶向于EGFR的抗体偶联药物为活性组分，还包括药学上可接受的载体。9.雷公藤红素在制备西妥昔单克隆抗体增敏剂中的应用。2CN112156184A说明书1/6页靶向于EGFR的抗体偶联药物、制备方法及应用技术领域[0001]本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及靶向于EGFR的抗体偶联药物、制备方法及应用。背景技术[0002]肿瘤的发病率和死亡率一直位于各种疾病前列，根据世界卫生组织国际癌症研究中心(InternationalAgencyfo