一种复合载药的细胞外囊泡吸入制剂及其制备方法和用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112870181A(43)申请公布日2021.06.01(21)申请号202110062348.3A61K31/519(2006.01)(22)申请日2021.01.18A61P35/00(2006.01)(71)申请人广东工业大学地址510062广东省广州市越秀区东风东路729号(72)发明人袁正强苏奎袁倩黎淑怡候欢孙健武黄超鸿(74)专利代理机构广东广信君达律师事务所44329代理人彭玉婷(51)Int.Cl.A61K9/72(2006.01)A61K9/12(2006.01)A61K47/46(2006.01)A61K38/17(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图4页(54)发明名称一种复合载药的细胞外囊泡吸入制剂及其制备方法和用途(57)摘要本发明提供了一种复合载药的细胞外囊泡吸入制剂及其制备方法和用途，采用该细胞外囊泡吸入制剂通过口腔吸入给药方式治疗肺肿瘤，可以有效延长治疗药物在体内的滞留时间，减少药物在体内其它非靶点组织和器官的分布，在增强治疗效应的同时降低药物的毒副作用，并且在动物模型中表现出显著抑制耐药性肺肿瘤生长的良好治疗效应。CN112870181ACN112870181A权利要求书1/1页1.一种复合载药的细胞外囊泡吸入制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将表达TRAIL的病毒转染产生细胞外囊泡的细胞，得到表达全长TRAIL的细胞；(2)培养所述步骤(1)得到的表达TRAIL的细胞，收集细胞培养后的上清液，从上清液中分离得到表达TRAIL的细胞外囊泡，用PBS溶液重悬表达TRAIL的细胞外囊泡，得到表达TRAIL的细胞外囊泡重悬液；(3)将小分子药物加入到所述步骤(2)中得到的表达TRAIL的细胞外囊泡重悬液中，将小分子药物载入表达TRAIL的细胞外囊泡，得到复合载药的细胞外囊泡重悬液；(4)将所述步骤(3)中得到的复合载药的细胞外囊泡重悬液雾化，得到复合载药的细胞外囊泡吸入制剂。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中病毒为慢病毒、逆转录病毒、腺病毒中的至少一种。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中产生细胞外囊泡的细胞为脐带间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞，牙髓间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、羊水间充质干细胞、羊膜间充质干细胞、人胚肾细胞293T、巨噬细胞、NK细胞、DC细胞、T细胞、肿瘤相关成纤维细胞中的至少一种。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中分离方式为超速离心；优选地，所述超速离心的离心力为120000g，所述超速离心的温度为4℃，所述超速离心的时间为2h。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中载入方法为超声法、膜穿孔法、共孵育法中的至少一种；优选地，所述步骤(3)中载入方法为超声法。6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中载入方法包括以下步骤：将小分子药物溶液与表达TRAIL的细胞外囊泡重悬液混匀后，在冰浴中进行超声处理，超声处理后孵育以促进EV膜的自然修复，孵育结束后，通过超速离心得到复合载药的细胞外囊泡，用PBS溶液重悬浮复合载药的细胞外囊泡，得到复合载药的细胞外囊泡重悬液。7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中小分子药物为增加肿瘤细胞对TRAIL敏感性的药物；优选地，所述步骤(3)中小分子药物为化疗药物、免疫治疗药物、天然活性产物分子、多肽和核酸类药物中的至少一种。8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中小分子药物为Dinaciclib。9.一种采用如权利要求1‑8任一所述的制备方法制备的复合载药的细胞外囊泡吸入制剂。10.如权利要求9所述的复合载药的细胞外囊泡吸入制剂在制备治疗肺肿瘤的药物中的用途。2CN112870181A说明书1/6页一种复合载药的细胞外囊泡吸入制剂及其制备方法和用途技术领域[0001]本发明涉及一种复合载药的细胞外囊泡吸入制剂及其制备方法和用途。背景技术[0002]肺部吸入给药制剂是以气溶胶形式将溶解或者分散到合适介质中的原料药物递送到肺部相应部位，发挥局部或者全身作用的一种剂型。肺部吸入给药是非侵入性的给药方法，可以将抗肿瘤药物局部递送到肺肿瘤组织，通过肺泡表面进入血液。与其它给药方式诸如口服和静脉注射相比，肺部吸入制剂可减少消化系统或血液中丰富的各种酶对蛋白或核酸类药物的降解，改善药物代谢动力学，更好地发挥药物的治疗作用。吸入气雾制剂的体内疗效主要受药物气雾剂物理性质影响，尤其是气雾剂微粒粒径大小及分布。空气动力学研究表明，直径大于10μm的气溶胶颗粒倾向于沉积在咽喉部位，5‑1